牛血清在细胞培养基中的实验步骤（一）

牛血清在细胞培养基中的实验步骤 

1. 取HeLa细胞和Mel细胞（本来应该取正常的二倍体细胞和不太好养的肿瘤细胞，但是实验室条件有限，本组做HeLa细胞），胰酶消化后，用无血清培养基（事先加双抗）吹打成细胞悬液（避免以前血清的干扰）。计数。

2.取4000个左右的HeLa细胞加入到每行的孔（在加之前要震荡培养基）。本实验经计数后应加11μL细胞。

3.在A和H行中孔加入89μL含标准血清（2004.12）的培养基。（对照组）

4.在A和H行中每一孔中加入100μL含标准血清的培养基。

5.将孔中的液体吸100μL至第二孔，从第二孔吸100μL至第三孔，然后相同。*后的100μL弃掉。这样就形成了从个孔到*后一个孔的细胞梯度从大约2056，1028等至1个。（要吹细均匀）

6.每个孔再补加100μL含标准血清的培养基。这可以保证孔中的营养物质。

7.在B行采取同样的方法。白介素ELISA试剂盒不同的是用含有需筛选的批号为011217血清代替标准血清。

8.在C至G行采用同样的方法。

9.将96孔培养板放入CO2 培养箱37℃培养一周。

10. 培养结束后，观察细胞生长的情况。比较在同一细胞浓度下的不同学清对细胞生长的影响。在同一细胞浓度下细胞生长数*多的培养基所含有的血清即可作为被选择的血清样品。

牛血清的主要成份

血清是一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已为人所知，但还有一部分尚不清楚，而且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。

1. 蛋白质是牛血清中主要成份。除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白，球蛋白。

纤维粘连素 细胞促进细胞附着；

α2 巨球蛋白 抑制胰蛋白酶的作用；胎牛血清中含胎球蛋白 促细胞附着；转铁蛋白 能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用。

2.多肽：血小板促生长因子能促细胞分裂，是多肽家庭的主要成员，是主要的促细胞增殖因子；成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，血清中含量虽很少，但对细胞生长也有一定作用。

3.激素：激素对细胞的作用是多方面的。

胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关。

类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用。

促生长激素：促细胞增殖效应。

：血清中含有定量的该成分，它可能兼有促细胞贴附和增殖作用，但有人证明，血清中的

，如细胞密度高时可能有抑制细胞的作用和诱导其发生分化。

4其他成份

氨基酸、葡萄糖、酮酸等对多种营养成分的合成培养基意义不大。与蛋白相结合状态的微量元素对细胞培养有意义。