[cDNA末端磷酸化]
1.70℃灭活反应后，稍微离心一下，置室温5分钟。
2.在反应混合物（10μl）中加入：
1μl10×连接缓冲液
2μl10mMATP
1μl（10μ）DNA激酶
[限制性内切酶消化]以得到粘性末端
1.限制性内切酶消化DNA和载体。
2.在37℃保温1~5小时，然后冷却到室温，如果选用定向插入，需用两个不同的限制性内切酶消化，可得到两个不同的粘性末端。
[cDNA大小的选择]
1. 在50μl的总体积中加入5μl0×STE缓冲液。
2.SephacrylS-400柱收集分离出的cDNA。
3.用酚，氯仿抽提。
4.酒精沉淀之后，悬浮cDNA在10μl的无菌水中。
[cDNA和载体连接]载体可用λgt10,λgt11或λZAPⅡ
cDNA(0.1~1μg)2.5μl
10×连接缓冲液0.5μl
10mMαATP0.5μl
载体（1μg/μl）1.0μl
T4DNA连接酶（4WeissU/μl）0.5μl
总体积为5μl
12℃保温过夜，或4℃两天，然后放在室温下2小时。
[包装]试剂由Strategene制备
1.包装提取物从-70℃取出立即放入干冰中。
2.同时化解超声提取物（黄色）。令在手指间溶解冻红色管，到刚刚开始化时，加1μlDNA置于冰上。
3.快速加15μl超声提取物到DNA中，仔细混合，避免气泡，在室温下保温2小时（22℃）。
4.加500μl噬斑稀释缓冲液（SM溶液），再加20μl氯仿，温和的混合。
5.离心弃去噬菌体碎片。这个cDNA文库可以测效价，保存于4℃中。
[制备ZAPⅡ文库的单链cDNA]
1.在一个50ml的圆锥形离心管中，加宿主菌250μl到SM液中：
SM液：20mMTrispH7.5
100nmNaCl
10nMMgSO4
0.2%Gelatin
2.37℃保温15分钟后，加5ml2×YT（其中每升溶液含10gNaCl,10g酵母提取物，16g胰酶解胨），37℃摇5小时。
3.然后在70℃保温20分钟。
4.4000g离心5分钟，以除去细菌裂解碎片。回收上清液。这里应含有诱导得到的单链重组噬菌体，同样还会有辅助噬菌体。滴度可以按细菌的形成单位来计算。