UPLC检测器校验

　　VWD检测器或TUV/DAD/PDA检测器

　　（1）波长准确度

　　①原理

　　检测器的波长准确度是一个关键性参数，尤其当测定有关物质含量时，波长不准确可能直接影响有关物质的相对响应因子。

　　②接受标准

　　VWD或TUV/DAD/PDA（咖啡因）：（205、245、273）±2nm；

　　（2）基线噪音和漂移

　　①原理

　　基线噪音直接影响样品杂质的检测限度，而线性对于纯度测定和含量测定的准确度具有决定性意义。

　　②可接受标准

　　安捷伦操作系统：

　　基线噪音≤0.1mAU

　　基线漂移≤5mAU/Hr（基线漂移有正负，取绝对值）

　　Waters操作系统（empower）：

　　平均峰到峰≤1×10-4 AU

　　检测器漂移≤5×10-3AU/Hr（基线漂移有正负，取绝对值）

　　岛津操作系统基线噪音≤100μV

　　基线漂移≤2500μV /30min

　　（3）检测器线性

　　①原理

　　定量测定时，在一定浓度范围内检测器的响应必须与样品浓度成线性。

　　②可接受标准

　　检测器的响应应当与样品浓度成线性：

　　峰面积之于进样浓度的相关系数r≥0.9990。

　　③测定方法

　　试剂：咖啡因UPLC甲醇超纯水

　　测试溶液

　　A.方法一

　　贮备液的配制：精密称取15.5mg固体咖啡因标准品，置25ml棕色量瓶中，用超纯水溶解并稀释至刻度。

　　B.方法二：

　　贮备液：0.5mg/ml的液体咖啡因标准品

　　操作步骤

　　设置进样序列：在样品盘中任意放置进样瓶，在工作站上设置序列进样，处理色谱图并打印处理结果。

　　计算

　　所有计算都应当采用应用软件计算。本节的目的是说明如何判断结果。

　　结果判断

　　测试活动应当被记录在仪器使用记录中，测试结果记录在校验记录中。

　　（二）RID检测器

　　测试项目：基线噪音，检测器线性，检测器定量限，检测器检测限

　　①原理

　　基线噪音直接影响样品杂质的检测限度，而线性对于纯度测定和含量测定的准确度具有决定性意义。

　　②可接受标准

　　基线噪音：≤10nRIU

　　基线漂移：≤400nRIU/Hr（基线漂移有正负，取绝对值）

　　甘油检测限：≤5×10-3mg/ml(即：此浓度下S/N≥3)

　　甘油定量限：≤1.5×10-2mg/ml(即：此浓度下S/N≥10)

　　线性：r≥0.9990，浓度与峰面积的比值的RSD≤5.0%

　　③测定方法

　　仪器设备:电子天平、容量瓶和移液管

　　试剂:甘油（AR）超纯水

　　测试溶液

　　贮备溶液：取甘油625mg，精密称定，置50ml棕色量瓶中，用超纯水溶解并稀释至刻度。

　　线性标准溶液：见下表

　　STD-1(0.5mg/ml)、STD-2(1.0mg/ml)、STD-3(1.5mg/ml)、STD-4(2.5mg/ml) 、STD-5(5.0mg/ml)。

　　检测限和定量限测定标准溶液：

　　检测限测定标准溶液STD-D：精密量取STD-1标准溶液1.0ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度。

　　定量限测定标准溶液STD-Q：精密量取STD-1标准溶液3.0ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度。

　　操作步骤

　　进样序列：依次测定基线噪音和漂移、检测限和定量限、线性，处理色谱图并打印处理结果。

　　计算

　　所有计算都应当采用应用软件计算。本节的目的是说明如何判断结果。

　　基线噪音和漂移:使用工作站自带软件计算基线噪音和漂移。

　　定量限和检测限测定:使用工作站自带软件计算甘油色谱峰的信噪比。

　　检测器线性:计算峰面积与进样浓度的比值的RSD；峰面积之于进样浓度的相关系数r。

　　仪器与工作站:仪器应当能与工作站正常连接，工作站应当能正常采集数据、处理数据和打印结果。

　　（三）荧光检测器

　　（1）波长准确度

　　①原理

　　检测器的波长准确度是一个关键性参数，尤其当测定有关物质含量时，波长不准确可能直接影响有关物质的相对响应因子。

　　②可接受标准

　　水拉曼峰：397±3nm

　　③测定方法

　　直接在控制面板上操作，记录结果。

　　（2）基线噪音

　　①原理

　　基线噪音直接影响样品杂质的检测限度，而线性对于纯度测定和含量测定的准确度具有决定性意义。

　　②接受标准

　　平均峰到峰（PTOP）≤1.0EU

　　检测器漂移≤10.0EU/Hr

　　③测定方法

　　仪器设备:阻尼管（50cm“length”×0.005“ID”）

　　试剂:超纯水

　　操作过程

　　开启仪器，如上设置色谱条件，预热30分钟

　　运行方法，采集30分钟信号

　　计算

　　工作站处理色谱图，选择合适模板打印色谱图。

　　结果判断

　　测试活动应当被记录在仪器使用记录中，测试结果记录在校验记录中。

　　（3）检测器线性

　　①原理

　　定量测定时，在一定浓度范围内检测器的响应必须与样品浓度成线性。

　　②可接受标准

　　检测器的响应应当与样品浓度成线性：

　　进样浓度与峰面积的比值的RSD≤5.0%；峰面积之于进样浓度的相关系数r≥0.9990。

　　③测定方法

　　仪器设备:无

　　试剂:萘UPLC甲醇超纯水

　　测试溶液

　　标准液的配制：精密称取10.0mg萘对照，置100ml棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度。精密移取1ml至100ml容量瓶,用甲醇定容。

　　进样序列：依次测定检测器线性，进样残留。处理色谱图并打印处理结果。

　　操作步骤

　　设置进样序列：在样品盘中任意放置进样瓶，在工作站上设置序列进样，处理色谱图并打印处理结果。

　　计算

　　所有计算都应当采用应用软件计算。此处目的是说明如何判断结果。

　　检测器线性:计算进样浓度与峰面积的比值的RSD；峰面积之于进样浓度的相关系数r。

　　仪器与应用软件连接：仪器与用软件之间的连接正常。采集、处理和报告数据正常。

　　（四）蒸发光散射检测器

　　测试项目：重新性、基线噪音

　　①原理

　　基线噪音直接影响样品杂质的检测限度，而重现性对于测定的准确度具有决定性意义。

　　②可接受标准

　　定性重复性应≤1.5%；

　　定量重复性应≤4.0%

　　基线噪音应≤1mv

　　基线漂移应≤5mv/30min

　　最小检测浓度≤5×10-6g/ml胆固醇-甲醇溶液

　　③测试条件

　　仪器设备：超高效液相色谱仪

　　标准溶液

　　STD1：5.0ug/ml (5×10-6g/m L) 的甲醇中胆固醇溶液，取200μg/ mL甲醇中胆固醇溶液0.5ml，置20ml容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，摇匀即可。

　　STD2：200μg/ mL甲醇中胆固醇溶液，可以直接购买标准溶液或自己配制。

　　200μg/ mL甲醇中胆固醇溶液的配制：精密称取20mg胆固醇，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，摇匀即可。

　　操作过程

　　开启仪器，如上设置色谱条件，预热30分钟，按下述序列进样，记录色谱图。

　　结果判断

　　测试活动应当被记录在仪器使用记录中，测试结果记录在校验就中。