基因工程的载体3

⑷基因组成

lDNA至少包括61个基因，大多基因按功能相似性成簇排列，其中一部分为噬菌体生命活动的必须基因，另一部分约1／3为非必须区段。

3. l噬菌体载体的类型

插入型 （Insertion vectors ）

这种载体仅仅有一个可供外源DNA插入的克隆位点。

如：λgt10 、 λgt11

克隆能力小，不到10kb

置换型 （Replacement vectors）

这种载体具有两个对应的酶切克隆位点，在两个位点之间的λDNA区段是λ噬菌体的非必需序列，可以被外源插入的DNA取代。

如Charon 4 载体

克隆能力大，20～25kb

（二）M13噬菌体

1、丝状噬菌体M13噬菌体的生物学特性

⑴是单链闭合环状噬菌体

只能感染雄性细菌，外形成丝状，基因组DNA长约6.4kb，可分为10个区和507 bp基因间隔区（IS区），该区可以接受外源DNA的插入而不会影响到噬菌体的活力。这是该噬菌体能用于单链DNA载体的重要前提。

⑵复制与增殖（图）

2. M13噬菌体载体的构建

⑴ 在IS区内插入LacZ基因 ⑵在标记基因区内组装MCS区段

所以能通过a互补在X-Gal/ IPTG平板上识别重组体。这类载体包括了 M13mp8、9 和 M13mp18 、 19等

这类载体的突出优点在于其既可以提供单链DNA，也可以提供双链的DNA。其最大的不足在于插入大的DNA片段后表现不稳定，在噬菌体增殖过程中容易发生缺失。所以一般克隆的片段在1kb之内，克隆300-400bp的片段十分稳定。

（三）柯斯质粒载体

1.柯斯质粒载体的特点

柯斯质粒是一类人工构建的含有lDNA的cos序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体，cosmid是cos site carrying plasmid的缩写。

柯斯质粒的大小为4-6kb，

由3部分组成：

A.多克隆位点区

B. 含有cos位点的lDNA区

C. 复制起始位点和抗性标记区

2.柯斯质粒载体的特性

1、具有l噬菌体的特性 柯斯质粒连接上适宜长度的外源DNA后可以在体外包装成噬菌体颗粒，并能高效转导寄主细胞。进入寄主细胞的DNA也能环化和复制，但是不会形成新的噬菌体颗粒，也不能发生溶菌现象。

2、具有质粒载体的特性 能象质粒一样在寄主细胞内复制，且带有抗性选择标记基因，有些还带有插入失活型的多克隆位点，为重组体的筛选提供了方便。

3、高容量的克隆能力 cos质粒本身很小，只有复制起点、选择标记和cos位点等构成，所以其克隆上限可达45kb左右。不过由于包装的限制，其克隆片段至少要达到30kb。

四种常用载体的比较