植物源TSB——无菌工艺模拟的理想选择

无菌制剂的药企至少每半年需要一次无菌工艺模拟（APS），又称为培养基灌装试验（MFT），以保证生产线的无菌生产。以往APS多用胰酪大豆胨液体培养基（简称TSB）。但欧洲药典EP 8.0-2014已提出非动物源材料的优先选择原则，以避免动物源成分可能带来的BSE/TSE风险。BSE/TSE发生率低，但在动物体内有潜伏期，没有明显症状，且一旦发现，影响巨大，故WHO、FDA与CE均有专章讨论降低BSE/TSE发生风险的措施。我国近年发布的《无菌工艺模拟试验指南（无菌制剂）》、《无菌工艺模拟试验指南（无菌原料药）》对此亦有提及：“包含动物来源成分的培养基，应考虑培养基引入外源污染的风险。如BSE（可传染性海绵脑病）、TSE（疯牛病）等风险”，并说“亦可使用植物来源的培养基”。（见《无菌工艺模拟试验指南（无菌原料药）》6.3.2.4条）

如植物源TSB性能与动物源TSB相符，且价格一致，则可不必考虑BSE/TSE等动物源成分带来的外源因子风险问题。在性能方面，《指南》规定有“培养基促生长能力试验”，所用标准测试菌株包括白色念珠菌（CMCC98001）、黑曲霉（CMCC98003）、枯草芽孢杆菌（CMCC63501）、金黄色葡萄球菌（CMCC26003）、铜绿假单胞菌（CMCC10104）和生孢梭菌（CMCC64941）（必要时）等。“还可考虑加入环境和无菌检查中发现的典型微生物。促生长试验接种量应小于100CFU。”

植物源TSB可采用湿热灭菌和辐照灭菌，无论何种灭菌方式，均“应对灭菌过程进行验证，辐照灭菌还需在产品质量报告中体现验证中所用的菌种和剂量等信息”。

早在2007年，Journal of Microbiological Methods(微生物学方法期刊）就发表了美国ATCC参与的一项研究，表明在促生长能力方面，植物源TSB完全可以替代动物源TSB。菌株的表型会发生轻微的变化，但不影响菌株品系的遗传学特征，即菌种鉴定不受影响。文中没有提所用植物源TSB的品牌。

在推动植物源培养基应用方面，HiMedia公司走在世界前列，不仅将各种植物源培养基配方标准化，而且具有世界比较多的植物源培养基品种，不少被载入2010年美国CPC学术出版社出版的第四版《微生物培养基手册》。在APS的应用方面，HiMedia公司推出了一系列植物源TSB产品，具体如下：

1、植物源TSB（辐照），粉末型，货号MV011G

2、植物源TSB（辐照），颗粒型，货号GMV011G

3、植物源TSB（辐照），粉末型，含MTF指示剂，货号MV2018G

4、化学限定TSB（辐照），粉末型，含MTF指示剂，货号MCD2018G

值得一提的是，颗粒型和粉末型培养基相比，没有扬尘和受潮的问题。TSB中添加MTF指示剂，可通过颜色变化显著区分是否有菌，见下图。化学限定TSB的好处是无批间差异。

HiMedia生产的植物源TSB（辐照，粉末型，货号MV011G）经过严格而全面的质控，合格后方能出厂。HiMedia生产工艺也具有ISO9001、ISO13485、WHO-GMP质量体系认证，产品具有美国FDA注册和欧盟IVDD注册证书。

MV011G的部分质控项目包括：

注：以下方法均根据美国药典和欧洲药典的方法进行。

1、灭菌过程的验证

包括无菌检查（连续14天30-35℃培养未观察到细菌生长，25-25℃培养未观察到真菌生长）和支原体检测（PCR）。该无菌检查同时也进行有检查过程的验证，即培养基用标准菌株接种≤100cfu进行测试，细菌在20-25℃培养不超过3天，真菌不超过5天，以验证如有如下菌种，则该培养基即能检查出来（表现为旺盛生长）。具体所用菌株包括：金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌ATCC8739、大肠杆菌ATCC25922、大肠杆菌NCTC9002、铜绿假单胞菌ATCC9027、铜绿假单胞菌ATCC27853、藤黄微球菌ATCC9341、阿博尼沙门氏菌NCTC6017、肺炎链球菌ATCC6305、枯草芽孢杆菌ATCC6633、鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、金黄色葡萄球菌ATCC6538、白色念珠菌（ATCC10231）、白色念珠菌（ATCC 2019）、巴西曲霉（ATCC 16404）。以上信息即回答了《指南》要求的“辐照灭菌还需在产品质量报告中体现验证中所用的菌种和剂量等信息”。

2、培养基促生长能力试验

菌株接种量≤100cfu，培养条件30-35°C 18-24小时。所用标准菌株有金黄色葡萄球菌ATCC 6538、金黄色葡萄球菌ATCC 25923、大肠杆菌 ATCC 8739、大肠杆菌 ATCC 25922

大肠杆菌NCTC 9002、铜绿假单胞菌 ATCC 9027、铜绿假单胞菌ATCC 27853、枯草芽孢杆菌ATCC 6633、藤黄微球菌ATCC9341、鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028、阿博尼沙门氏菌NCTC6017、肺炎链球菌ATCC 6305。以上菌株即已包括《指南》提到的几乎所有菌株，只是用的是ATCC来源的。对于《指南》提到的白色念珠菌（CMCC98001）和黑曲霉（CMCC98003），在灭菌验证中测试过。只有《指南》提到的生孢梭菌（CMCC64941）没有测试，指南提到是必要时才去测试，企业可自行测试。

3、稳定性检查

这一点指南未作要求。HiMedia质控要求室温下放置7天，仍为淡黄色溶液，无任何沉淀产生。

总之，HiMedia生产的植物源TSB系列产品能满足《指南》的各种要求，能够给药企的APS提供便利，值得大力推广。

缔一生物作为HiMedia公司中国区总代理，在制药和生命科学领域，一如既往地为您带来的服务。