染色方法：
1．涂片经火焰固定，加结晶紫液染1 min，清水冲去染液。
2．加碘液染l min，水洗。
3．加脱色液，不时摇动约10～30s，至无紫色脱落为止，水洗。
4．加复染液，染30s，水洗。
5．干后镜检。
二、抗酸染色
抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。染厚涂片时，须掌握复染色时间。如果背景过深，影响镜检。
奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性，取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象，视野中有些菌细胞阳性，另外一些则阴性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察时应予注意。
抗酸染色有两种常用方法：① 碱性复红法又称萋纳(Ziehl—Neelsen)法。 ② 荧光染料金胺O法(也称金胺O-罗丹明B法)。
碱性复红染色法
试 剂
1．萋纳石炭酸复红溶液
碱性复红乙醇饱和溶液 10ml
5％石炭酸溶液 90ml
2．脱色剂 *
浓盐酸 3ml
95％乙醇 97ml
3．复染液(吕弗勒美蓝液)
美蓝乙醇饱和溶液 30ml
10％氢氧化钾 0.1ml
蒸馏水 100ml
染色方法
1．涂片经火焰固定，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。染5 min(若染色奴卡菌需要加长时间)，水洗。
2．加脱色剂，不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗。
3．加复染液，染0.5～l min，水洗。
4．干后镜检。分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。
*：奴卡菌、放线菌标本染色时，脱色剂改用2％硫酸水溶液。
(二)金胺O-罗丹明B染色法
染 剂
1．罗丹明B液：罗丹明B 0.1g加蒸馏水100ml；
2．0.1％金胺O液：金胺O 0.1g加蒸馏水95ml，再加入纯石炭酸5ml，混匀；
3．3％盐酸酒精；
4．稀释美蓝液：吕弗勒美蓝液10ml，加蒸馏水90ml，混匀。
方 法
涂片固定后加第1液30～90s。
弃去第1液后加第2液染15min。
用第3液脱色1～2min，水洗。
滴加第4液染30s，水洗，待干，荧光抗酸菌在暗背景中呈现金黄色荧光。
三、鞭毛染色
用于观察菌体上有无鞭毛、鞭毛在菌体上的位置以及鞭毛的数量。在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。
鞭毛染色可以直接从平板上挑选菌落，或从斜面上刮菌苔涂片即可，但必须注意动作尽量轻，以免鞭毛从菌体上脱落。菌落应是
生长在营养较好的琼脂平板(如血平板、营养琼脂)上的过夜培养物。不可采用有抑制剂的选择性培养基，如中国蓝、麦康凯、SS琼脂等。观察鞭毛时，应耐心寻找整个涂片上的菌细胞，因为并不是涂片上每个细菌细胞上的鞭毛特性及数量都一样，应以鞭毛数量最多的菌细胞为准。
鞭毛染色(改良Ryu法)
试剂
A液： 5％石炭酸 10ml
鞣酸 2g
饱和硫酸铝钾液 10ml
B液： 结晶紫酒精饱和液
应用液：A液10份，B液1份，混合，室温存放。
染色方法
1．玻片的处理：要求用新的载玻片。用前须在95％酒精中浸泡24小时以上。用时从酒精中取出，以干净纱布擦干后使用。
2．在玻片上滴蒸馏水两滴。一张玻片上可同时制2个涂片。
3．用接种环挑取血平板上菌落少许，将细菌点在玻片上的蒸馏水滴的顶部。一般只需点一下，仅允许极少量细菌进入水滴，不可搅动，以免鞭毛脱落。
4．玻片置室温自然干燥。
5．滴加染液于玻片上，染色。
6．约10～15min后，用蒸馏水缓慢冲去染液。冲洗时应避免使染液表面的金属光泽液膜滞留在玻片上，影响镜检。
7．玻片自然干燥后，镜检时应从涂片的边缘开始，逐渐移向中心。寻找细菌较少的视野，鞭毛容易观察。细菌密集的地方，鞭毛被菌体挡住，不易观察。
四、异染颗粒染色
用于白喉棒状杆菌染色，异染颗粒可明显地被显示出来。
标本直接涂片或细菌涂片均可用改良阿伯特(Albert)法染色来观察异染颗粒。
试 剂
甲液： 甲苯胺蓝 0.15g
孔雀绿 0.2g
冰醋酸 1ml
95％乙醇 2ml
蒸馏水 100ml
将各染料先溶于乙醇，然后加入水与冰醋酸的混合液中，充分混匀。静置24h后过滤备用。
乙液： 碘 2g
碘化钾 3g
蒸馏水 300ml
先将碘化钾加少许蒸馏水(约2m1)，充分振摇，待完全溶解，再加入碘，使完全溶解后，加蒸馏水至300ml。
染色方法
1. 涂片经火焰固定，加甲液，染3～ 5 min。水洗。
2．滴加乙液，染l min。水洗。
