五、墨汁荚膜染色
用于观察菌体有无荚膜结构，借此鉴定某些菌，如新型隐球菌。
传统的方法是用印度墨汁，但目前国内无售。常规工作可以用墨汁或墨水代替，但应注意颗粒不能太粗，否则影响观察结果。有人用5％黑色素(nigrosin)水溶液做染料，效果较好。
试 剂
印度墨汁或5％黑色素水溶液。
染色方法
将标本与1滴染色液在载玻片上混合，加上盖玻片，轻轻压一下，使标本混合液变薄。在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞。找到后，转换高倍镜确认。
葡萄球菌属
一、常规鉴定
葡萄球菌的鉴定：首先须与其他的革兰阳性球菌鉴别，然后再作属内种的鉴定。
(一) 与其他革兰阳性球菌鉴别
临床标本中常见到的革兰阳性球菌，除葡萄球菌属外，还有微球菌属和气球菌属等。所以，在菌属内菌种鉴定之前，首先与这几属细菌鉴别(见表)。
表 葡萄球菌属与其他革兰阳性球菌的鉴别 a
菌名 特 征 b
严格需氧 四联状排列 紧粘琼脂 动力 琼脂 触酶 氧化酶
改良法 厌氧下葡萄糖产酸 耐 药
杆菌肽 f
0.04U/片 呋喃唑酮 g
100ug/片
葡萄球菌属 - D - b - + + - d + -
气球菌属 - + - - + - - (+) - -
动性球菌属 + D - + + + ND - ND -
口腔球菌属 - D + - - 土 - + - -
微球菌属 + + - - + + + - - +
注： a．葡萄球菌属、动性球菌属、口腔球菌属、微球菌属皆隶于微球菌科。
b．符号：+，90％以上阳性；土，90％以上弱阳性；一，90％以上阴性；d，1l％一89％阳性；ND，未试验；( ) 迟缓反应。
c．在某些菌种中出现触酶弱阳性或假阳性反应，是由于在培养中补充血红素，活化某些菌株触酶活性。
d．Faller和Schleifer改良氧化酶试验为检出细胞色素C。
e．标准的氧化—发酵试验。
f．+，耐药或无抑菌环，微球菌、口腔球菌、气球菌敏感，抑菌环10～25mm。
g．十，耐药或抑菌环≤9mm；一，敏感，抑菌环15～35mm。
h．表皮葡萄球菌有些菌株生长时紧固地粘附于琼脂表面，此种特性与细菌产生浓的粘液相关。
1．与链球菌鉴别：葡萄球菌与链球菌的区别如下：在镜下，葡萄球菌以单、双、葡萄状排列，菌体呈圆形。链球菌以成单、双、链状排列，菌体形态为圆形或椭圆形。葡萄球菌触酶试验阳性，链球菌则阴性。
2．与微球菌的鉴别：实验室常用的鉴别依据是形态和发酵葡萄糖产酸。在镜下，葡萄球菌以葡萄状排列为主，菌体较小；微球菌以四联排列为主，且菌体较大。葡萄球菌发酵葡萄糖产酸试验阳性，微球菌阴性。此外杆菌肽、呋喃唑酮敏感试验有利区别两属菌种。
(二) 临床8种常见葡萄球菌的鉴别
目前葡萄球菌已被命名有27个种。临床标本中最常见有意义菌种是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌和猪葡萄球菌。首先用凝固酶试验将其分为凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌(包括中间和猪葡萄球菌)和凝固酶阴性的其他葡萄球菌，然后用新生霉素敏感试验。推断新生霉素耐药为腐生葡萄球菌。下表列出了关键鉴定试验来区别上述8个菌。
二、试验方法
(一)触酶试验(过氧化氢酶试验)
试剂：3％H2O2溶液，置棕色瓶内于4℃阴暗处保存。
方法：先挑取固体培养基上的菌落，置于洁净的玻片上，然后滴加3％过氧化氢溶液1～2滴。静置之，lmin内产生大量气泡的为阳性，不产生气泡的为阴性。
表 有临床意义的8种葡萄球菌关键性鉴定
菌种 试 验
菌落色素 葡萄球菌凝固酶 凝聚因子 耐热
酶 碱性磷酸酶 吡咯烷酮酶 鸟氨酸脱羧酶 脲
酶 β半乳糖苷酶 产生
新生霉素耐药 多粘菌素耐药 需氧下产气
D
|
蕈
糖 D
|
甘露醇 D
|
甘露糖 D
|
松二糖 D
|木糖 D
|
纤维二糖 麦芽糖 蔗 糖
金黄色葡萄球菌 + + + + + - - d - + - + + + + + - - + +
表皮葡萄球菌 - - - - + - (d) + - + - + - - (+) (d) - - + +
溶血葡萄球菌 d - - - - + - - - + - - + d - (d) - - + +
里昂葡萄球菌 d - (+) - - + + d - + - d + - + (d) - - + +
施氏葡萄球菌 - - + + + + - - (+) + - - d - + - - - - -
腐生葡萄球菌 d - - - - - - + + + + - + d - + - - + +
中间型葡萄球 - + d + + + - + + - - - + (d) + d - - ± +
猪葡萄球菌菌 - d - + + - - d - - - + + - + - - - - +
注意点： 1．注意过氧化氢为3％，应用30％浓的H2O2，用时稀释10倍。
2．不应在培养基上做试验。
3．每次试验时，应以阳性和阴性菌株做对照。
