需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普通琼脂培养基上即可生长。最适生长温度为37℃，最适宜pH值为7.4。在20%的CO2环境中有利于毒素产生。在肉汤培养基中经37℃培养18～24h，呈均匀混浊生长，管底稍有沉淀。在普通琼脂平板上形成圆形、凸起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明的菌落，直径2～3 mm。属内不同菌种因产生金黄色、白色或柠檬色等脂溶性色素而使菌落着色。致病菌株在血平板上生长后，在菌落周围可见完全透明溶血环（β溶血）。该菌耐盐性强，在含10%-20%氯化钠培养基中仍能生长，故可用高盐培养基分离葡萄球菌。
触酶试验阳性。多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖产酸不产气。致病菌株能分解甘露醇，血浆凝固酶试验多为阳性。