用作报告基因的荧光素酶基因emphasis:role=italiclucemphasis主要来自细菌和萤火虫。
细菌荧光素酶以脂肪醛为底物,在还原型黄素单核苷酸参与下,使脂肪醛氧化为脂肪酸,同时释放出光子。萤火虫的荧光酶在镁离子、三磷酸腺苷和氧的作用下,催化6-羟基喹啉类物质生成氧化荧光素,同时放出光子。依据上述原理建立的荧光素酶基因的检测方法简便、灵敏。
其工作原理如下:将昆虫荧光素和ATP与表达荧光素酶的植物细胞混合,该酶催化昆虫荧光素的氧化反应,生成AMP、COsubscript2subscript和光,因此表达荧光素酶的重组植物细胞或组织可用胶片感光的方法进行检测和示踪。
例如,将重组植物的叶子表面用砂纸磨损,然后浸入含有昆虫荧光素和ATP的缓冲溶液中保温若干时间,晾干,将X光胶片覆盖在叶子上,则表达昆虫荧光素酶的部位就会使胶片感光。
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