ZIC®-HILIC色谱柱快速检测婴幼儿奶粉中双氰胺
默克密理博应用实验室 2013-01-29
1 前言
2013 年1 月,新西兰牛奶及奶制品被检测出含有低含量的有毒物质双氰胺(二氰二氨Dicyanodiamide,DCD),已经下令禁售含有DCD的奶制品。中国的进口奶粉八成来自新西兰,全球60%以上的奶源产自新西兰。新西兰奶农通常会在牧草上喷洒双氰胺,防止肥料中的副产品硝酸盐流入河流和湖泊。
目前,还没有相应的食品含量标准和检测标准。默克密理博致力于分析方法的开发,为客户提供简便、快速的解决方案。双氰胺极性较强,易溶于水,中性及酸性条件下易电离,适合使用默克密理博的两性离子型亲水作用(ZIC®-HILIC)色谱柱分离。同时,双氰胺在218nm下有强紫外吸收,可以采用ZIC®- HILIC 色谱柱在HPLC-UV条件进行快速分析,亦可在LC-MS/MS进行痕量检测。
2 仪器及试剂
2.1 仪器设备
2.1.1 色谱柱:ZIC®-HILIC, PEEK HPLC Column 250 x 4.6 mm, 5 μm, 200 Å(1.50458.0001)
2.1.2 HPLC:Agilent 1260HPLC(DAD检测器)
2.1.3 单道移液器Transferpette®S,Digital adjustable 500-5000ul(Brand:BR704782)
2.1.4微孔滤膜:0.45um,PTFE(Millipore:SLFHX13NL)
2.1.5纯水系统:Milli-Q3(Millipore)
2.1 仪器设备
2.1.1 色谱柱:ZIC®-HILIC, PEEK HPLC Column 250 x 4.6 mm, 5 μm, 200 Å(1.50458.0001)
2.1.2 HPLC:Agilent 1260HPLC(DAD检测器)
2.1.3 单道移液器Transferpette®S,Digital adjustable 500-5000ul(Brand:BR704782)
2.1.4微孔滤膜:0.45um,PTFE(Millipore:SLFHX13NL)
2.1.5纯水系统:Milli-Q3(Millipore)
2.2 试剂
2.2.1色谱乙腈:LichroSolv®Acetonitrile Gradient Grade(1.00030.4008)
2.2.2乙酸铵:Ammonium acetate for analysis EMSURE® ACS,Reag. Ph Eur(1.01116.1000)
2.2.3甲酸:Formic acid 98-100% for analysis EMSURE® ACS,Reag. Ph Eur(1.00264.1000)
2.2.4 2%甲酸溶液:取20ml甲酸,加入1000ml超纯水中
2.2.5 70/30乙腈-甲酸溶液:去700ml乙腈(2.2.1),与300ml 甲酸溶液(2.2.4)混合
3 实验方法
3.1 样品处理
方法1:
取婴幼儿配方奶粉2g于50mL PP管中,加18mL 2%的甲酸水溶液,加盖密闭。摇振60秒,再超声30分钟,取出,再摇振60秒,放入离心机中离心(4000转),20分钟。取出,吸取上清液50ul,于10ml PP管中,加入950ul乙腈,加盖密闭,振摇60秒,吸取溶液,过滤,即得供试液。
方法2:
取婴幼儿配方奶粉2g于50mL PP管中,加20mL 乙腈-甲酸水溶液,加盖密闭。摇振60秒,再超声30分钟,取出,再摇振60秒,静置,吸取上层溶液,过滤,即得供试液。
加标样品同法配制。
3.2 测试条件
3.2.1 色谱条件
流动相 (v/v): A-醋酸铵溶液(10 mM),B-乙腈
比例*:A:B=12:88
流速:1 mL/min
进样量:20ul
*必要时设置如下方法对色谱柱进行再生和平衡:
时间,min | % | % | 流速 ml/min | |
0 | 12 | 88 | 1 | 等度 |
10 | 12 | 88 | 1 | 等度 |
10.5 | 30 | 70 | 2 | 再生 |
15 | 30 | 70 | 2 | 再生 |
15.1 | 12 | 88 | 2 | 平衡 |
20 | 2 | 88 | 2 | 平衡 |
3.3 测试结果
按照方法1处理,结果如下:
3.3.1 对照品图谱
(DCD浓度1.25ug/ml)
双氰胺保留时间4.98min,理论塔板数13086,拖尾因子1.2.
3.3.2 无检出的奶粉空白
3.3.3 奶粉加标
测试液中加入的标样浓度:5ug/ml
测试液中加入的标样浓度:0.05ug/ml.
3.3.4 某知名品牌奶粉
该品牌奶粉中未检出双氰胺.
4 结论
采用ZIC®-HILIC色谱柱,可用于双氰胺的快速检测。处理方法简单,色谱峰型良好,方法重现性良好(RSD<2%),检测浓度在 0.5-10ug/ml之间现行关系良好(R=0.999),加样回收率在95.6-101.5%之间。按照方法1的处理,LOD为1.3ug/g奶粉,按照方法二处理,LOD可达0.07ug/g。
该色谱柱还能用于三聚氰胺、双氰胺、三聚氰酸、二甲双胍、尿素等的同时检测,如:
另外,LC-MS/MS采用如下色谱条件:
色谱柱:ZIC®-HILIC (5 µm, 200Å) PEEK 150x2.1 mm
流动相:A: 95:5 ACN:0.1% formic acid/10 mM ammonium formate in H2O
B: 50:50 ACN:0.1% formic acid/10 mM ammonium formate in H2O
梯度方法
Time (min) | Solution A (%) | Solution B (%) | Flow rate (mL/min) | Elution |
0.0-5.0 | 100 | 0 | 0.400 | isocratic |
5.0-12.8 | 100-25 | 0-75 | 0.400 | gradient |
12.8-15.8 | 25 | 75 | 0.400 | isocratic |
15.8-16.0 | 100 | 0 | 0.400 | equilibration |
16.0-24.9 | 100 | 0 | 0.600 | equilibration |
24.9-25.0 | 100 | 0 | 0.400 | equilibration |
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