纳米纤维固相萃取柱萃取高效液相荧光法分析头发皮质醇

摘要采用基于纳米纤维固相萃取的高效液相色谱-荧光测定( HPLC-Flu) 法测定头发中的皮质醇水平。以新型纳米纤维萃取柱( PFSPE) 提取头发样本浸出液，用100 !L 乙醇洗脱，再加入230 !L 浓H2 SO4反应2 min，反应物加水混合后用PFSPE 柱提取，最后用50 !L 甲醇直接洗脱后注入色谱体系进行分析。此方法的检出限为0． 05 ng /g( S /N = 3) ，日内精密度和日间精密度分别低于6． 8% 和8． 9%，平均方法回收率为88．9%。本方法提取过程简便、快速、环保，而且可以准确测定头发样本中的皮质醇水平。

    在精神生物学研究中，皮质醇( 啮齿类动物是皮质酮) 是一种非常重要的激素，它被称为“压力荷尔蒙”，人体面临生理、心理刺激时，其分泌量增高( 应激反应) ［1］。目前研究中采用的血液、唾液、尿液等样本测试皮质醇的水平，只能反映应激及时变化或一定时间内的累积情况。而对于研究对象一段时间( 数月以上) 的应激情况进行了解，就可以采用头发这种生物样本。研究证实，头发能够反映人体长期的摄药信息( 可以追溯到几个月之前) ，头发皮质醇是一种很好的研究长期下丘脑-垂体-肾上腺轴( HPA 轴)活性的工具，可以客观测量慢性应激［2］。Pereg 等［3］指出，在诸多心梗发病征兆中，头发的皮质醇水平是判断发病风险最明显的生物学标志物。采用头发基质，对于分析测试具有很多优势，如头发生长规律，为研究者提供一种追溯性研究窗口; 头发采样无创、简便、无需专业指导; 头发样本可以室温储存等［2］。头发皮质醇分析将成为生理学、精神医学、体育医学、认知科学、心理学等众多学科的重要研究手段。
    目前，头发中皮质醇测定多采用放射免疫法［4］、酶联免疫法［5］及LC-MS 法［6］。免疫法灵敏度较高，能够检测出头发中的痕量皮质醇，但存在交叉反应、测定结果偏高。各种商业性的免疫试剂盒测定的结果差异性较高，试剂盒的成本也较昂贵。LC-MS 法虽然准确灵敏，但需要昂贵的仪器，故一般实验室难以普及。此外，还有HPLC-Flu 法测定头发中皮质醇分布的报道［7］，采用传统SPE 和溶剂萃取的方法分别提取头发浸出液和硫酸衍生产物。本研究优化改进了头发样本前处理操作，用本研究组建立的基于电纺纳米纤维的固相萃取技术( Packed-fiber solid-phase extraction，PFSPE) ［8，9］取代文献方法SPE 和溶剂萃取步骤，省略了挥发提取溶剂浓缩目标物的操作，使热不稳定的目标物提取效率大大提高，同时使前处理操作时间大大缩短、操作更为简便，实现了头发中皮质醇的高效灵敏检测。