α淀粉酶的测定实验

4-α-D-葡聚糖葡聚糖水解酶

磷酸钾麦芽糖溶液淀粉溶液二硝基水杨酸试剂

分光光度计

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.05 ml 淀粉溶液

0.05 ml 酶样品（稀释于 0.1 mol/L 磷酸钾，pH7.0）。

25 ℃ 培养 5 min

0.1 ml 二硝基水杨酸试剂

在 100 ℃ 混合 10 min

1 ml H₂O

测 546nm 处吸收值值。

借助校准曲线测出酶的活性。浓度范围在 4～30 ul 的麦芽糖溶液，用水补充到 0.1 ml，而后向每个样品中添加 0.1 ml 二硝基水杨酸试剂。100℃ 孵育 10 min 后，加入 1 ml 水，并测 546 nm 处吸收值。

计算。

1 个单位被定义为：25℃、pH 7.0 时，每分钟从可溶淀粉中释放 1 mol 还原基团的酶量。

试剂：

0.1 mol/L 磷酸钾，pH 7.0

10 mmol/L 麦芽糖溶液（一水合物，Mr＝360.3；36 mg 麦芽糖溶于 10 ml 水中）

淀粉溶液（0.5 g 可溶淀粉，17.5 mg NaCl，溶解于 50 ml 0.1 mol/L 磷酸钾溶液 pH 7.0，煮沸溶解）

二硝基水杨酸试剂（3，5-二硝基水杨酸，2-羟基-3，5 二硝基苯甲酸，Mr＝228.1；溶解 1 g 于 20 ml 2 mol/L NaOH 和 50 ml 水，溶解 30 g K-Na-酒石酸并用水补充至 100 ml）。