α酮戊二酸脱氢酶的测定实验

α-酮戊二酸脱氢酶

磷酸钾MgCl2α-酮戊二酸焦磷酸硫胺素K3［Fe（CN）6］牛血清蛋白

分光光度计

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.98 ml 实验混合物

0.02 ml 酶样品

30℃ 时，于 436 nm 处吸收值发生变化，ε₄₃₆＝755 l/（mol·cm）

试剂：

0.1 mol/L 磷酸钾，pH 6.5

0.1 mol/LMgCl₂（MgCl₂·6H₂O，Mr＝203.3；203 mg 溶于 10 ml 水中）

0.5 mol/L α-酮戊二酸（α-酮戊二酸盐，Mr＝190.1，二钠盐，0.95 g 溶于 10 ml 水中）

0.01 mol/L 焦磷酸硫胺素（ThDP，脱羧辅酶，Mr＝460.8；46.1 mg 溶于 10 ml 水中），

0.1 mol/L K₃［Fe（CN）₆］（Mr＝329.2；330 mg 溶于 10 ml 水中）

1％ 牛血清蛋白（BSA，100 mg 溶于 10 ml 水中）