发布时间:2020-08-17 17:37 原文链接: α酮戊二酸脱氢酶的测定

实验方法原理


实验材料 α-酮戊二酸脱氢酶

试剂、试剂盒 磷酸钾MgCl2α-酮戊二酸焦磷酸硫胺素K3[Fe(CN)6]牛血清蛋白

仪器、耗材 分光光度计

实验步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」


0.98 ml 实验混合物



0.02 ml 酶样品


30℃ 时,于 436 nm 处吸收值发生变化,ε436=755 l/(mol·cm)

 

注意事项

其他

试剂:


0.1 mol/L 磷酸钾,pH 6.5


0.1 mol/LMgCl2(MgCl2·6H2O,Mr=203.3;203 mg 溶于 10 ml 水中)


0.5 mol/L α-酮戊二酸(α-酮戊二酸盐,Mr=190.1,二钠盐,0.95 g 溶于 10 ml 水中)


0.01 mol/L 焦磷酸硫胺素(ThDP,脱羧辅酶,Mr=460.8;46.1 mg 溶于 10 ml 水中),


0.1 mol/L K3[Fe(CN)6](Mr=329.2;330 mg 溶于 10 ml 水中)


1% 牛血清蛋白(BSA,100 mg 溶于 10 ml 水中)