λ噬菌体的载体表达实验

表达载体

SDS LB

培养箱 分光光度计 离心机

1.  将表达载体转化携有温度敏感突变的抑制基因的大肠杆菌溶源菌。转化物涂布于LB/抗生素平皿上，32℃下温育。

2.  于抗生素培养基中，32℃培养转化菌。

3.  以≥1：20的比例将过夜培养物稀释往新鲜的LB/抗生素培养基中，在32℃以250~300 r/min 转速振荡培养直至OD₆₅₀=0.6~0.8。 

4.  在摇动下，加1/3体积的65℃LB/抗生素培养基，迅速将培养物的温度提高到42℃，在42℃继续培养2~3 h。

5.  取出1 ml 液体做分析用，余下的于4℃经3 000 g（低速转子）离心15 min，细胞沉淀在-70 0℃冻结保存以备分离基因表达产物所用。

6.  以最大速度离心1 ml 培养物，沉淀重悬于50 μl SDS样品缓冲液中，煮沸5~10 min，进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析基因表达产物。