一文了解细胞培养血清的使用方法

在细胞培养实验中，血清的使用是关键环节之一，其保存、解冻和灭活操作的正确性直接影响细胞的生长状态和实验结果的可靠性。以下是血清保存、解冻与灭活的操作流程，供实验人员参考：

一、血清保存方法

1、长期保存温度：血清如需长期保存，必须储存于 -10℃或更低温度的冰箱中，建议存放于 -20℃的冰箱。

2、不建议-80℃保存：虽然储存在 -80℃条件下的血清在性能方面变化不大，但由于解冻时温差过大，会导致析出更多沉淀，使得背景杂乱，因此血清长期保存不建议处于 -80℃条件下。

3、短期频繁使用：如果近期会频繁使用血清，建议不要在 4℃条件下存放超过 1 个月。

4、分装保存：若一次无法用完整瓶血清，建议分装后保存，且要避免反复冻融。

5、预留体积空间：血清冰冻后体积会增加约 10%，因此血清分装时需留意预留一定的体积空间。

6、运输条件：运输血清时，应使用冷冻冰包或干冰运输，以确保血清在运输过程中保持低温

二、血清解冻方法

1、缓慢溶解：将血清置于 2 - 8℃冰箱中，缓慢部分溶解 12 - 24 小时。

2、室温全溶：随后将血清放置于室温下使其完全溶解。

3、均匀摇动：在溶解过程中，需每隔一段时间轻轻摇动血清，以确保其均匀混合。

4、禁止快速解冻：切勿使用 37℃水浴进行快速解冻，以免血清中蛋白质沉淀增加，影响质量。

5、避免长时间存放：解冻后的血清不宜在 4℃冰箱中长时间存放。

三、血清灭活方法

在细胞培养中，血清的热灭活是一个常见的操作，但并非所有实验都需要进行热灭活。实验表明，经热灭活处理的血清对细胞生长可能仅有微小促进作用，甚至完全没有作用。高温处理可能会导致血清中部分营养成分的损失，从而影响血清质量，降低细胞的生长速率。此外，热灭活过程中如果局部温度过高、摇晃不均匀或灭活时间过长，都会导致血清品质下降，并增加蛋白沉淀的概率。因此，除非实验明确要求，否则不建议对血清进行热灭活处理。

如果确实需要进行热灭活，可以按照以下步骤操作：

（一）准备阶段

1、摇匀与恢复室温：热灭活前，必须先将解冻后的血清摇匀，并恢复至室温。

2、取样与对照管准备：取部分摇匀血清置于 50ml 离心管中，并准备同规格对照管一个。

3、对照管加水：对照管内加入血清等体积水。

4、温度预试：对照管内插入温度计进行温度预试。

（二）灭活过程

1、温度控制：当温度达到 56℃时，将恢复至室温的血清放入水浴锅中，灭活 30 分钟。

2、均匀晃动：灭活过程中需要每隔 5 分钟轻轻晃动摇匀，以保证温度均一。