一维固相pH梯度等电聚焦(IEFwithIPG)——聚焦时间的优化

蛋白样品

理论上讲，要获得最好的图谱质量和重复性所需最佳时间是 IEF 分离达到稳定态所需的时间 。 若聚焦时间太短，会导致水平和垂直条纹，但要避免过度聚焦 。 虽然与经典 O'Farrell 法相比，不会导致蛋白质向阴极的迁移（阴极漂移），但却会因为活性水转运而导致过多水在 IPG 胶表面渗出（电渗）， 会造成蛋白图谱变形。在胶条碱性端产生水平条纹以及蛋白质丢 失。 最佳聚焦时间必须根据不同蛋白质样品、蛋白上样量和所用特定 pH 范围及 IPG 胶条长度通过经验来确定。作为指导，表 3.1 和友 3.2 给出了针对一系列不同宽和窄 pH 范围 IPG 的优化保焦时间。