关于淘汰血清非蛋白氮测定
淘汰血液非蛋白氮测定的原因及可替代的项目和方法
淘 汰 的 理 由
非蛋白氮是血液中蛋白质以外的低分子含氮化合物中氮的总称，这些化合物包括尿素、肌酐、肌酸、尿酸、氨基酸、氨和谷胱甘肽等。最常用的测定方法是血液无蛋白滤液经强酸消化后，用萘氏试剂反应显色，产生棕黄色碘化双汞铵。
淘汰非蛋白氮测定的原因：一、方法操作步骤繁杂，影响因素多，回收率低，准确度和精密度差；二、不能自动化分析；三、正常人血液非蛋白氮中约50％为尿素氮，尿毒症时尿素氮占80％以上。大多数情况下，非蛋白氮和尿素测定的临床意义相同，所以尿素测定可以取代非蛋白氮测定。
可替代的项目和方法
一、血清尿素二乙酰一肟测定法 (不除蛋白的直接法，适于手工操作)
(一)原理
在强酸和加热条件下，二乙酰一肟生成二乙酰。后者与尿素反应生成红色复合物。加入硫脲和钙离子可提高反应灵敏度、线性和显色的稳定性。
(二)试剂
1．酸性试剂
于1升容量瓶中加入蒸馏水100ml，然后加入浓硫酸44ml及85％磷酸66ml，冷却后加入硫脲50mg及苹酸镉(3CdS04．8H2O)2g，溶解后用蒸馏水稀释至1升，贮棕色瓶中，置冰箱，可保存半年以上。
2．20g/L二乙酰一肟试剂
二乙酰一肟20g，用蒸馏水溶至1升，贮棕色瓶中，置冰箱，可保存半年以上。
３．尿素标准液
10．71mmol／L(相当于氮300mg／L)精确称取干燥恒重纯尿素64．2mg，用蒸馏水溶解后加入苯甲酸100mg，以蒸馏水加至100ml。
(三)操作见表1。
表1? 血清尿素二乙酰一肟法操作步骤(ml)
测定管 | 标准管 | 空白管 | |
血清或血浆 | 0．02 | — | — |
尿素标准液 | — | 0．02 | — |
蒸馏水 | — | — | 0．02 |
酸性试剂 | 5．0 | 5．0 | 5．0 |
二乙酰一肟试剂 | 0．5 | 0．5 | 0．5 |
混均、煮沸10分钟，流水冷却。在540nm用1cm光径比色杯以空白管调零，读取各管吸光度。
计算： 标本管吸光度
尿素(mmol/L)=-----------------×10.71
标准管吸光度
(四)附注???
1．血清尿素含量超过线性范围12mmol／L时，应将血清稀释后测定。
2．尿液标本用蒸馏水稀释50—200倍后测定。
3．显色后，随时间延长有轻度褪色现象，故显色后应及时比色。
4．本法缺点是干扰因素较多，精密度不够高，试剂对人体有害和加热步骤不便于自动分析。???
二、尿素酶—谷氨酸脱氢酶偶联速率法测定尿素 (适用自动分析)
(一)原理
尿素酶
尿素＋H2O---------→2NH3＋H2O
谷氨酸脱氢酶
NH3＋α-酮戊二酸＋NADH＋H----------------→谷氨酸＋H2O＋NAD+
在340nm测定吸光度。其降低比例与NADH氧化的初速率或尿素浓度成正比。
(二)试剂
以某尿素(氮)测定试剂盒为例：
α-酮戊二酸 7．5mmol／L
NADH 0.32mmol／L
尿素酶(巨豆) 80001Μ／L
谷氨酸脱氢酶(牛) 10001Μ／L
ADP 1.2mmol／L
Tris缓冲液 100mmol／L
保存剂 适量
测定参数
温度 30℃或37℃
波长 340mm
吸光度范围 0—2A
比色杯光径 1．0cm
线性反应时间 1分钟
延迟时间 30秒
反应体积 1ml
标本体积 0．010ml
计算： 标本△A/分
尿素mmol/L＝---------------×标准浓度
标准△A/分
线性范围：35mmol／L以内。
参考值：2.3～7.8mmol／L(与年龄、性别和蛋白质摄入量有关)。
(三)附注
1．本法特异性高，快速，干扰少，适用自动化分析。
2．文献或试剂盒中酶、α-酮戊二酸、ADP、NADH用量配比差异较大，所以在使用试剂盒时，必须通过实验获得最适条件。试剂盒中尿素酶和谷氨酸脱氢酶浓度配比十分重要。尿素酶浓度不足时，即使增加谷氨酸脱氢酶浓度，反应速率仍然不会加快。只有当尿素酶适量时，反应速率才随谷氨酸脱氢酶增加而明显提高。而α-二酮戊二酸浓度过高则会抑制酶反应。ADP可增强反应速率，但高浓度的ADP时反应速率的增加逐趋下降。
3．尿素测定的尿素酶-波氏显色法? 尿素被尿素酶水介生成氨，用酚-次氯酸钠显色。本法易於常规使用，但反应时间较长。
4．电导法? 尿素被尿素酶作用生成NH4+和C032—离子使导电率增加。本法特异性高，可自动化分析，但需特殊仪器，不便推广。
（庄一义）
【编者注】
长期以来，临床上血清(浆)尿素测定习惯以“尿素氮”一词报告结果，用法定单位可出现两种计算方法。一种是以尿素的毫摩尔数报告，另一种以尿素经水解后生成的铵(NH4+)中的氮原子的毫摩尔数报告，两者结果相差一倍。
用尿素氮来表示血清(浆)尿素含量是有历史根源的。早期用比色法、滴定法或量气法测定尿素。不少方法最后系测定尿素分子中的氮含量，结果以氮的浓度(mg／dl)表示。这样也便于与过去常用的非蛋白氮(NPN)测定结果相比较，这一习惯至今仍在沿用。虽然国际单位系统及世界卫生组织建议用尿素的毫摩尔数(mmol／L)报告结果，但在实际工作中的很多场合，人们仍在沿用以氮的浓度(mg／d1)报告结果，以致引起—定程度的混乱。
目前测定血清(浆)尿素的方法可分为两大类：即直接化学法和酶法。直接化学法亦称二乙酰一肟法，根据尿素与二乙酰反应缩合生成红色二嗪类化合物的原理，直接测定尿素而非尿素中的氮。酶法虽然测定经脲酶水解尿素生成的NH4+但实质仍是测定尿素，使用蹈标准工作液亦为尿素。如果用尿素氮报告结果是不合躁的，应以尿素的实际含量报告结果。
建议今后血清(浆)尿素测定统一以尿素一词，并以其mmol／L浓度报告结果。惯用的尿素氮mg／d1浓度换算成尿素的mmol／L浓度时，应乘以0．357，即：尿素氮mg／d1X 0．357＝尿素mmol／L。
长期以来惯用尿素氮的英文缩写BUN一词是由Blood Urea Nitrgen的首个字母组成、实际上目前测定尿素都采用血清或血浆标本，没有或很少采用全血标本，而且测定物是尿素而不是尿素氮。可见BUN一词已不切合实际情况，建议废用。