三色书虱外部形态的扫描电镜观察

实验概要

本实验运用扫描电镜对三色书虱的外部形态进行了观察，旨在为该虫的正确鉴定提供基础资料。

主要试剂

饿酸[Polysciences Inc.]

戊二醛[国药集团化学试剂有限公司]

叔丁醇[中国医药集团上海化学试剂公司]

单宁酸[天津市大贸化学试剂厂]

乙腈[天津市大贸化学试剂厂]

主要设备

光学显微镜[OLYMPUS]

S-3000N电子显微镜[HITACHI]

E-1010/E离子溅射仪[HITACHI]

实验材料

三色书虱采自野外，在实验室内建立种群。

实验步骤

1. 玻片制作

将用75%-80%酒精浸泡的书虱标本用70%的酒精洗涤2-3次，用加拿大胶封固，在45℃烘箱中烘15天左右，干燥后用指甲油加封盖玻片的四周，第一次干燥后，再二次加封，防止固定胶内的水气透出以免干燥。所有更换液体的操作在一个小玻皿内进行，用吸管将血内液体吸出，再用另一吸管吸取其他液体放入皿内，以免损坏标本。

2. 电镜前处理

按以下步骤依次进行：

   (1) 用1.5 mL的离心管取三色书虱50头或更多，因为在处理过程中会有样品损失；

   (2) 将2.5%的戊二醛约l mL加入离心管中并置于4℃冰箱里固定2h或过夜；

   (3)用一次性注射器吸出离心管中的戊二醛，再加入约lmL的pH值为7.8的磷酸缓冲液并适当震荡清洗样品，重复3次，每次15-30 min；

   (4) 用注射器吸出磷酸缓冲液，加入1%的饿酸约500µL固定1h；

   (5) 用双蒸水清洗4次，每次15-30 min；

   (6) 用2%的单宁酸约500µL浸泡2h或过夜(单宁酸能与饿酸结合，增加电子反差，使更多饿酸分子和样品分子结合)；

   (7) 用双蒸水清洗4次，每次15-30 min；

   (8) 再加入1%的饿酸约500µL固定1h后，用双蒸水清洗4次，每次15-30 min；

   (9) 依次经过30%，50%，60%，70%，80%，90%，100%酒精脱水，每次15 min；

   (10) 采用叔丁醇一乙腈干燥法进行干燥：50%叔丁醇处理10 mim，70%叔丁醇处理10 min，100%叔丁醇处理10 min，叔丁醇一乙睛(2:1)处理10 min，叔丁醇一乙睛(1:1)处理10 min，100%乙睛处理10 min；

   (1l ) 用E-1010/E离子溅射仪进行离子镀膜。