上海巴斯德所高产流感疫苗研发取得新进展

　　近期，国际学术期刊Vaccine 在线发表了中国科学院上海巴斯德研究所分子病毒课题组的研究论文A Vero-cell-adapted vaccine donor strain of influenza A virus generated by serial passages（《通过连续传代获得甲型流感病毒Vero细胞适应性疫苗株》）。

　　流感病毒一直危害人类健康，其中甲型流感病毒因变异快、宿主范围广、亚型和毒株众多等原因极易引发感染。目前，预防流感最有效的方法是接种流感疫苗。20世纪40年代起，通过接种鸡胚扩增得到流感疫苗毒株一直是生产流感疫苗的通用方法，然而不断增长的疫苗和疫情防控需求使鸡胚生产平台中鸡胚供应不足、卵清蛋白过敏以及产量有限等诸多缺陷越来越明显。因此, 研发易于扩大化培养、无过敏反应、并能够更好地保持抗原性的哺乳动物细胞培养系统成为生产流感疫苗的新一代热门介质。非洲绿猿猴肾细胞系（Vero）、犬肾细胞系（MDCK）以及胚胎视网膜细胞系（PER.C6）都被选为人用流感疫苗的生产介质，其中Vero细胞系已成功用于人用狂犬、脊灰等疫苗的生产，安全性得到充分认证。然而，目前通用的流感病毒疫苗骨架株PR8病毒在Vero细胞上的生长非常有限，导致Vero细胞流感疫苗产量受限，如何提高PR8疫苗株在Vero细胞上的产量和效率是将Vero细胞开发成流感疫苗二倍体细胞生产介质的关键技术。

　　上海巴斯德所副研究员徐柯及博士研究生胡伟斌、张宏等在孙兵研究员的指导下，将PR8病毒在Vero细胞上连续进行20次传代获得了Vero细胞的适应株PR8-p20。通过病毒全基因组测序以及反向遗传学构建重组病毒，最终鉴定到病毒内部基因NP、PB1、PA和NS1上的四个氨基酸位点突变决定了PR8病毒在Vero细胞上的适应性，并将含有这四个突变位点的PR8病毒命名为PR8-4mut。病毒生长曲线结果表明，PR8-4mut病毒比现有的PR8疫苗株生长更快，可在病毒接种后48小时即达到最高病毒滴度，相对PR8病毒滴度提高1000倍。因此，以PR8-4mut作为疫苗骨架株构建的禽流感（H5N1、H7N1和H9N2）和人流感（H1N1和H3N2）疫苗株在Vero细胞上的产量都可大幅提高，而且研究得到的Vero细胞适应株PR8-4mut在小鼠和鸡胚上的致病力与PR8相当，并保持胰酶依赖性。研究结果表明，PR8-4mut是能够包装各种亚型流感病毒HA和NA，保持分离株原始抗原性的甲型流感疫苗Vero细胞骨架株。

　　该项研究获得了国家自然科学基金、国家“863”项目以及赛诺菲安万特——上海生命科学研究院青年人才等项目的支持。