为什么出现多条带？

为什么出现多条带，每个加样槽中都出现了多条带，而且好像都很有规律，为什么？是封闭时间不够吗？做Western必须要内参吗？

一抗、或二抗抗体浓度太高，多克隆抗体本身的非特异性反应，抗体的特异性不强，目的蛋白经过处理后发生变化，而内参的条带基本均匀一致，这样才有说服力。表明的确是处理因素造成目的蛋白的变化而不是加样误差或人为造成目的条带浓度的变化，严格意义上讲，内参是必须的。