固定柱床层析是一种多功能的分离技术,常用于生物医药的分离中。
无论是在保证纯化过程的稳定性还是保证最终产物的安全性上,填充柱的制备和质量认证都是极为重要的步骤。
即使柱效检测不能作为单一参数对后期的纯度和回收率进行预测,至少在启动纯化工艺前可作为一种快速途径对层析柱和设备性能进行检测。所以需要检测柱效。
1,系统准备
对系统和管道进行润洗准备
清除在包装、储存或运输过程中累积在管道和分流系统中的空气
将层析柱置于1.5 柱体积以上的洗脱液中进行平衡。若柱平衡在盐溶液中进行,则需要保证出口的电导和入口的电导一致。平衡时的液流方向需与测试时一致。测试方向既可向上流也可向下流。
2,运行脉冲柱效检测
将提前准备好的一定体积的样品(1%柱体积)加载于柱上,上样最好采用样品环,超级容量杯或样品泵。
3,通过测定峰宽和对称性评价
相对峰宽通常用一定数量的理论塔板(N),
一个理论塔板的等价高度(HETP)
颗粒半径 (d/P)
或更常用折合了的塔板高度(h)来进行描述:
h=HETP/d/P 对称性As
对称因子As 描述了与理想高斯峰形状的偏差,通过对10%
峰高处的峰宽进行计算得到:
As=b/a
1、选用细颗粒的填料,可获得高柱效。2、降低流动相流速,使得渗透时间变长,有利于达到高柱效。3、流动相粘度低,溶质在流动相中的扩散系数大,有利于加快传质,可获得高柱效。4、采用低配比固定液,有利于减小......
色谱柱的分离效果取决于所选择的固定相,以及色谱柱的制备和操作条件。柱效受柱内外因素影响,为使色谱柱达到最佳效率,除柱外死体积要小外,还要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。色谱柱......
判断色谱柱柱效下降可以通过以下几个途径:1.看峰分离度怎么样,分离度直接关系测试结果准确性,可以判断柱效是知否下降,柱效下降分离度一般会变差。2.通过谱图峰型的变化,是否有严重前伸和拖尾现象,道峰型是......
柱效(columnefficiency),是指色谱柱保留某一化合物而不使其扩散的能力。柱效能是一支色谱柱得到窄谱带和改善分离的相对能力。色谱柱的有效塔板数越大或有效的塔板高度越低,色谱柱的柱效越好,类......
1.总柱效高毛细管柱内径一般为0.1~0.7mm,内壁固定液膜极薄,中心是空的,因阻力很小,而且涡流扩散项不存在,谱带展宽变小.由于毛细管柱的阻力很小,长可为填充柱的几十倍,其总柱效比填充柱高得多.2......
2.热损坏超出色谱柱的温度上限会造成固定相和管表面的加速损坏。这样会造成色谱柱的过分流失,活性组分形成拖尾,以及/或降低柱效(分离度)。幸好热损坏是一个很慢的过程,因此,在色谱柱严重损坏之前还有一段很......
一、固定液非极性:SE30*,OV101,SE54*中极性:OV17,XE60*,OV1701*极性:PEG20M*,FFAP*,DEGS*二、柱内经(mm)0.2~0.25柱效高、负荷量低、流失小0......
一.减小柱内展宽,提高柱效 l.固定相:①粒度小,均匀,以减小涡流扩散和流动相传质阻力;②改进结构,尽可能采用大孔径和浅孔道的表面多孔型载体或全多孔微粒型载体,减少滞留流动相传质阻力。&nb......
一.载气及流速1.载气对柱效的影响:主要表现在组分在载气中的扩散系数Dm(g)上,它与载气分子量的平方根成反比,即同一组分在分子量较大的载气中有较小的Dm(g)。根据速率方程:(1)涡流扩散项与载气流......
要提高液相色谱的效率可从以下几方面入手。(1)降低移动相的流速,但会使分析时间延长。(2)减少固定相的量,但色谱柱中样品的负载量也随之减小。(3)减小固定相的颗粒度,但不能过分,过分后色谱柱的渗透率也......