乙腈用量减半的简单方法

图1. 安捷伦ZORBAX溶剂节省柱使乙腈用量减少了50%以上，不需要改变液相色谱仪的配置。

乙腈在全球范围内的短缺，对分析实验室造成了很大冲击，如何在不影响工作效率的前提下尽量减少乙腈的用量，成为了众多分析实验室目前所面临的巨大问题，针对这一现状，安捷伦为各个行业的用户提出了一系列的解决方案，主要包括以下几方面内容。

减小柱内径

如果您想使用现有的液相色谱配置，并使方法改变最小，减少乙腈消耗的一个办法是将4.6mm 安捷伦ZORBAX柱换成3.0mm内径的安捷伦ZORBAX溶剂节省柱。因为所有ZORBAX填料都有溶剂节省柱，在大多数情况下，您只需要降低色谱柱流速，方法修改即可完成。在分析的样品浓度非常高的极少数情况下，为了避免色谱柱超载，可能还需要减少进样量或样品浓度。图1表明，换成内径更小的色谱柱使乙腈用量减少了50%。

图2. 在不影响分离度的情况下，分析时间和溶剂用量减少了四分之三。

降低填料粒径

节约乙腈的另一个方法是将色谱柱换成相同键合相但粒径更小的柱子。您可以使用更短的同样内径色谱柱，获得相同的分离效果。短柱带来了色谱分离更快和节省溶剂两个好处，如图2所示。上述两种基于色谱柱规格改变所带来的方法参数的改变，可以通过安捷伦提供的方法转换软件（Agilent MethodTranslator）轻松计算获得。

图3. 不同比例的甲醇和乙腈洗脱强度的对比。

使用其他溶剂

如果可以或者希望使用其他溶剂替代乙腈，甲醇可能是最为合适的选择，可以节省100%的乙腈使用，但是由于选择性和洗脱能力的不同，可能需要重新开发合适的方法，对于洗脱强度的改变，这里提供了一个简单的图表进行比较（图3），但是溶剂的改变对于选择性的改变是很难预测的，这种情况下，我们可以使用1200系列的自动方法开发系统（MDS）进行新方法的开发，通过对固定相，流动相比例等等各方面的自动调整，自动开发得到合适的新方法，见图4。

图4. 通过自动方法开发系统进行自动的流动相比例优化。

优化样品前处理方法

如果确定要使用更为节省溶剂的分析方法取代原来的分析方法，不妨尝试通过同时改变样品前处理的方法获得更多的溶剂节省效果，比如调整样品稀释的比例或次数；对于复杂的样品，固相萃取技术（SPE）是很良好的前处理方法，它的优势在于：固相萃取可以有效去除基质中的杂质，降低干扰，使得分离变得更加容易，从而可以缩短分析时间，减少了溶剂的消耗（图5）；此外，经过SPE净化后的样品，对于色谱柱的污染更小，可以有效节省冲洗色谱柱所使用的溶剂。安捷伦提供了SampliQ系列的多种固相萃取小柱，针对不同类型的样品，提供最适合的解决方案。

图5.  经过SPE处理后的样品色谱图，由于干扰杂质的减少，使得进一步缩短分析时间成为可能。

优化方法设计

通过对分析方法的重新评估，可以缩短分析时间，从而有效节省溶剂的消耗，比如：

是否可以使用重叠进样功能，以节省分析时间？

是否可以考虑在样品交叉污染很小时，减少洗针的时间或次数？

是否可以使用离线数据处理功能，减小每个样品的在线分析时间？

是否可以使用交替柱再生技术（ACR）进一步提高样品通量？

对于梯度方法，是否可以考虑在不影响分析结果的情况下，适当减少重新平衡的时间或者减少高有机相比例冲洗时间？

溶剂回收

对于等度分析方法，可以使用溶剂回收阀来回收流动相，达到对溶剂的最大节省，安捷伦提供的示差折光检测器（RID）带有自动溶剂回收功能，此外安捷伦还可以提供二位/六通CAN valve作为溶剂回收阀使用。

此外，作为长期对策，您还可以通过以下方法减少乙腈用量：使用1200 RRLC系统或者1290 Infinity LC系统进行更加高效快速的分离；使用自动方法开发系统（MDS）开发更加优化的分析方法；采用“小型化”的系统，如安捷伦提供的Chip-LC, Cap-LC, Nano-LC等技术；尝试改变分离模式，如毛细管电泳（CE）或者超临界流体色谱（SFC）技术等。 

SRS Pro溶剂再生系统

2009年4月23日，鉴于当前全球乙腈紧缺状况，赛默飞世尔科技公司推出了SRS Pro溶剂再生系统，该系统可以对一些贵重溶剂进行再次利用，将流动相的损耗缩减了90%。在等强度高效液相色谱（HPLC）运行过程中，该新型的创新系统可以改变流动相的流动方向，通过再生使得无污染的流动相再次进入到溶剂储存器中。该系统的USB接口、方便的即插即用操作，使其成为色谱实验室进行高效利用溶剂的理想选择。

SRS Pro系统的设计非常现代、非常紧凑。作为溶剂节省装置，它不需要电源适配器，而是通过USB接口与安装有色谱数据处理软件的计算机相连，从而启动该装置行使功能。此外，软件的易于操作性确保了系统参数的简单配置，还包含了在线监测功能和审计跟踪功能。

通过对色谱检测器输出信号的持续监测，流动相随着监测结果的变化而改变流动的方向。当基线低于一个临界值时，流动相通过SRS Pro系统回收后流入溶剂储存器中，可进行反复使用。如果基线高于该临界值，洗脱液改变流向进入废液储存器。而且该系统设计中也考虑到检测器监测到信号与转换开关的打开与关闭之间的传输时间，不会因为两者之间的时差而导致流动相污染。当信号再一次回到基线以下，流动相又再次改变流向流入溶剂储存器。另外，SRS Pro系统是用来进行流动相再生的，它只有在SRS Pro系统被打开时才会行使功能。那么，一旦该系统出现故障，转换开关阀将自动被放置在废液储存器位置，保证溶剂储存器中的流动相不会被污染。