凝胶过滤层析法（Gel filtration chromatography,GFC）又称凝胶排阻层析或分子筛层析，是利用化学惰性的多孔网状结构的物质为固定相，通过洗脱液的洗脱，使混合物中的各种物质根据分子大小不同得到分离，在洗脱过程中，分子质量最大的物质无法进入凝胶网孔而沿凝胶颗粒间的空隙被洗脱最先流出柱外，而分子质量最小的物质可以进入凝胶网孔而受网孔的阻拦，缓慢洗脱出来，最后流出柱外。与其他色谱法相比，凝胶过滤色谱最大的特点是操作简便，适用于大规模分离纯化过程。但凝胶层析由于洗脱液洗脱会稀释样品，降低样品浓度，往往凝胶过滤层析后需要浓缩步骤。凝胶过滤层析具有所需设备简单、操作方便、分离迅速，溶质与介质不发生任何形式的相互作用，可以采用恒定洗脱法洗脱，操作条件温和，不影响样品的生物活性等优点，广泛应用于大分子物质的分离纯化。