二氢硫辛酰胺脱氢酶的测定实验_还原反应

酶样品

磷酸钾NAD＋NADHDTEEDTADL-硫辛酰胺

分光光度计

0.93 ml 实验混合物

0.05 ml 0.2 mol/L DL－二氢硫辛酰胺 10 mol/L

0.02 ml 酶样品

30 ℃ 时，于 340 nm 处吸收值发生变化，ε₃₄₀＝6.3×10³ l/（mol·cm）。

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.1 mol/L 磷酸钾，pH 7.5

0.1 mol/L NAD＋（游离酸，Mr＝663.4；663 mg 溶于 10 ml 水中）

0.01 mol/L NADH（二钠盐，Mr＝709.4，71 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L DTE（二硫赤藓糖醇，Mr＝154.2；或二硫苏糖醇，DTT，Mr＝154.2；154 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L EDTA（Mr＝292.2；292 mg 溶于 10 ml 水中）

0.2 mol/L DL-硫辛酰胺（6，8-硫辛酰胺，Mr＝205.3；51 mg 分别溶于 1.25 ml 乙醇或者丙酮中）