二级菌种和三级菌种培养基的制备实验

一、实验目的

1．了解二级菌种和三级菌种培养基配制的原理；

2．掌握制作二级菌种和三级菌种培养基的关键技术；

3．学会固体培养基含水量的简易测定方法。

二、实验材料

木屑、种木、麦麸、石膏粉、糖、水、高压锅、750g菌种瓶或12cm×28cm×0.04cm的聚丙烯（低压聚乙烯）折角袋、棉花、棉线、牛皮纸、水桶、磅秤、铁锹、扫帚、酒精灯、L形铁棒、无棉盖体等。

三、培养基配方（二级菌种和三级菌种培养基配方）

1．木屑麦麸培养基（适于各种木腐类食用菌）  阔叶树木屑78%，麦麸20%，蔗糖1%，石膏粉1%，pH 7.0，含水量为60%。

2．种木培养基（适于各种木腐类食用菌）种木5份，木屑麦麸培养基1份，蔗糖（按干种木重）1%-2%。

四、实验步骤

1．以木屑麦麸培养基为例

①按配方中比例称取木屑、麦麸、石膏粉，在干净水泥地面上混合拌匀。

②按配方中比例称取蔗糖，溶于少量的水中做母液，使用时冲稀。

③将蔗糖水先与混匀的干料搅拌均匀，然后再酌情加水，边拌边检查含水量，直至用手握紧培养料时，指缝有水纹渗出，但没有水滴下为度。

④木屑培养基调湿拌匀后，分装于750g菌种瓶（袋）中，先装入2/3，用手握住瓶颈，瓶底放在木屑堆上轻轻礅4～5次，使培养基沉实，然后继续加装到瓶颈。

⑤用L形铁棒把培养基压实至瓶肩，并把培养基表面压平。培养基的松紧度要求瓶底、瓶中部稍松，上部稍实，以利通气发菌。

⑥用直径为1.5 cm的尖尾木棒在培养基中央钻一个圆洞，洞深为料层的4/5，整平洞穴四周料面。

⑦洗净瓶壁，将已装好培养基的瓶竖放在装有清水的大盆内，洗净外壁，然后将菌种瓶倒置略倾斜放入水中，让水进入至接近培养基料面（不要接触料面），旋转玻璃瓶，利用瓶内水旋转冲力，将瓶肩内壁木屑冲洗干净。

⑧用干布将瓶口擦干，塞上棉塞，棉塞的表面要光滑，松紧适中，以捉住棉塞头而整个容器不会跌落，又能拔出棉塞为宜。

⑨包上牛皮纸，放入高压锅中灭菌，压力是0. 11～0. 14MPa，1.5～2h。

2．种木培养基先把制好的种木（楔形或圆柱形）晒干后，放入1%～2%的蔗糖水溶液中浸泡12～16h，让其吸足水分。取一块圆柱木用小刀从中央纵切开，无白心为吸足了水分。然后用五份种木，加入1份配好的木屑麦麸培养基，混匀后装瓶，种木之间用木屑培养基填满，最后在面上再盖一层木屑培养基，用L形铁棒压面，以防洗涤时种木跌落。塞好棉塞，包上牛皮纸．高压灭菌(0. 14MPa，2h)。

3．塑料袋装培养基

(1)称料、拌料。按比例和要求配制培养基，如配制木屑麦麸培养基同上述木屑麦麸培养基制备过程。

(2)装料。先装入少量的培养基，将袋底整成方形，然后边装料边压，使其松紧适中，整平料面后，用1. 5～2. 0cm直径的圆形尖头木棒，在料中央打洞，洞深为料层的4/5，整平洞穴四周料面。

(3)封口。将塑料套环(高3.5cm，口径3cm)套入塑料袋口，向外翻折，用手把口攥实，塞上棉塞，包上牛皮纸。

(4)灭菌。如采用高压灭菌0.11～0. 14MPa，2h，应缓慢放气，否则易引起胀袋。

五、实验报告

1．简要叙述二级菌种和三级菌种培养基制作步骤。

2．如何用手测法检查培养料的含水量？