亚硫酸氢盐修饰后测序法检测甲基化

实验材料 DNA
试剂、试剂盒 NaOH苯二酚（氢醌）亚硫酸氢钠石蜡油
仪器、耗材 离心管恒温水浴锅铝箔纸
实验步骤 
1.将约2ugDNA于1.5mlEP管中使用DDW稀释至50ul；
 
2.加5.5ul新鲜配制的3M NaOH；
 
3. 42℃水浴30min；
 
水浴期间配制：
 
4.10mM对苯二酚（氢醌），加30ul至上述水浴后混合液中；（溶液变成淡黄色）
 
5. 3.6M亚硫酸氢钠（Sigma，S9000），配制方法：1.88g亚硫酸氢钠使用DDW稀释，并以3M NaOH滴定溶液至PH 5.0，最终体积为5ml。这么大浓度的亚硫酸氢钠很难溶，但加入NaOH后会慢慢溶解，需要有耐心。PH一定要准确为5.0。加520ul至上述水浴后溶液中。
 
6.EP管外裹以铝箔纸，避光，轻柔颠倒混匀溶液。
 
7.加200 ul 石蜡油，防止水分蒸发，限制氧化。
 
8.50℃避光水浴16h。