实验材料 毒株标准血清
试剂、试剂盒 牛血清Hanks 氏液琼脂糖
仪器、耗材 水浴锅24孔板孵箱
实验步骤
一、试验目的
血清分型。
二、实验材料准备
1. 标本
出血热恢复期病人血清
2. 材料
（1） 毒株 汉滩病毒标准株 76-118，汉城病毒标准株 Seoul；
（2）标准血清 兔抗汉滩病毒、汉城病毒血清；
（3）空斑减少中和试验常用试剂。
三、步骤
1. 将待检血清用牛血清Hanks 氏液稀释成1：10，56℃灭活30分钟；
2. 进一步2倍稀释血清成1：20、1：40、1：80……，对照血清1：10稀释；
3. 稀释两种病毒（在冰浴中进行）至含200 pfu/ml；
4. 各连续稀释度血清分别与200 pfu/ml的两种病毒液等量混合（各0.3 ml），置37℃中作用1小时（每15分钟振荡一次）；
5. 吸出各细胞培养孔中维持液；
6. 接种长满单层的Vero-E6细胞（24孔板），每孔接种血清病毒混合液、标准血清对照及两种病毒对照 ，每稀释度两孔，100 ul/孔。37℃吸附1小时，每隔15分钟摇动一次；
7. 加第一层琼脂糖覆盖液（需冷置42℃左右），每孔1 ml，室温下待凝固，细胞面朝上，置37℃5%CO2孵箱培养7-9天；
