1. 石蜡切片常规脱蜡至水,PBS 洗 3×3 min。
2. IHC 的前处理视特异性一抗不同,可采用蛋白酶消化或热诱导的微波抗原修复(AR),PBS 洗 3×3 min。
3. 3% 过氧化氢孵育 10 min(可省略),以阻断内源性过氧化物酶活性。
4. PBS 洗 3×3 min。
5. 10% 非免疫性动物血清孵育 10 min(可省略),以减少非特异性背景,无需冲洗,只需吸去多余血清。
6. 滴加适当稀释的第一抗体,37℃ 孵育 60 min 或 4℃ 过夜。
7. PBS 洗 3×3 min。
8. 滴加生物素标记的二抗,37℃ 孵育 30~60 min。
9. PBS 洗 3×3 min。
10. 滴加过氧化物酶标记的链霉亲和素,室温孵育 30 min。
11. PBS 洗 3×3 min。
12. 0.04% DAB(含 0.03% H2O2)显色 5~10 min。
13. 复染,脱水,常规树胶封固,结果观察。 展开 |