人瘦素在毕赤酵母中的表达及其分离纯化

【摘　要】目的：为了获得人Leptin（瘦素或瘦蛋白）而进一步研究其生理作用、作用机制与病理意义。方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法，从人腹部皮下脂肪组织中分离脂肪细胞总RNA，经逆转录、PCR扩增出肥胖基因的编码序列
（Ob基因cDNA），再克隆到表达载体pPICZα中，在毕赤酵母菌株GS115中表达。结果：PCR的扩增产物长度为462bp，克隆后的表达产物，经SDS-PAGE证实，约为分子量为17kD的特异蛋白条带，与人瘦素的理论预计值相符合，经放免法测定，表达量达到36mg/L。通过其多聚组氨酸接头与金属镍螯合的亲和层析法纯化表达蛋白，在SDS-PAGE上呈现分子量为17kD的单一蛋白条带。结论：通过基因工程手段已成功表达出人瘦素并分离纯化得到纯度较高的人瘦素。