人胃癌细胞ncin87细胞培养基本技术（五）细胞分散法

五、细胞分散法

1． 机械分散 对于脑、胚胎、肿瘤等软组织，先用组织匀浆器研磨组织，再通过细胞筛获得单细胞悬液。

2． 胰蛋白酶消化 适合于消化间质较少的软组织，传代细胞消化也常采用，是应用较广泛的消化酶，由于Ca2+ 和Mg2+ 对胰蛋白酶活性有一定抑制作用，因此须用不含这些离子的缓冲液配制。将组织剪成1mm3大小，置于容器中，加入30～50倍体积的0.25%胰蛋白酶液，消化30～60min。

3． 胶原酶消化 对胶原有较强的消化作用，适用消化纤维组织、上皮组织及瘤组织等。胶原酶的使用终浓度为200U/ml或0.1～0.3μg/ml，其消化作用缓和。一般将3～5倍胶原酶溶液加入已剪碎的组织块中，数小时或10余小时后，可见组织块逐步变小至几乎看不见，原来澄清的消化液转变成混悬液时，可以终止消化，如组织块较大、细胞量较多时，可于消化期间换消化液一次。消化液经低速离心5min后，去上清液，加入20％小牛血清培养液，轻轻打散细胞团，制成细胞悬液。

4． EDTA溶液分散 使用浓度为0.02%的EDTA溶液。常用于传代细胞的消化，作用温和，毒性小。