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化学发光(chemiIuminescence)是在化学反应过程中(主要为氧化还原反应)发出可见光的现象【4】。早在19世纪7O年代,Radzisewski(1877)等发现咯粉碱在碱性介质中与过氧化氢等进行氧化还原时,有光子产生(发绿光)。Albrecht(1928)证明了鲁米诺在碱性介质中具有发光作用。Glue和Petsh(1 935)第一个报告了光泽精在碱性条件下与过氧化氢反应产生化学发光。
化学发光反应是由两个关键步骤组成:激发和发射。许多化学反应进行时能释放足够的自由能而把参加反应的物质之一激发到能发射光的电子激发态,生成一种激发态产物(c ),在它回到基态时,剩余能量转变成光子能量(h )产生发光现象,即A+B—c ,然后c 一C+h,其中 表示c处于单线激发态。化学发光的光谱与c的荧光相一致。
随着化学发光物质合成技术的进步,化学发光在生物医学及其它领域的应用越来越广泛【5_ ,将化学发光与免疫反应结合起来建立的化学发光免疫测定法和化学发光标记是继荧光标记,放射性核素标记,酶标记三大标记技术之后,发展起来的最新检测技术。用化学发光法、化学发光免疫测定法可检测多种物质,其检测极限达到10—15mol。近2O年来在此领域发表有关论文达数千篇,我国在这方面的研究虽然起步较晚,但也取得了很大进步,例如用黄嘌呤氧化酶一鲁米诺(xo—L)化学发光体系测定不同茶叶清除超氧阴离子的能力[8】,发现不同品种的茶叶的抗氧化活性存在一定的差异,一般情况下绿茶优于乌龙茶和红茶,名茶优于普通茶,优级茶优于次级茶;利用该系统还讨论了影响茶叶抗氧化能力的条件。利用化学发光研究血小板对多形核白细胞fPMN)化学发光的调控作用,发现腺苷酸对PMN化学发光的调控作用具有浓度依赖性,且呈双相效应【9】等。这些工作促进了我国化学发光体系的研究。
化学发光的原理
化学发光是物质在进行化学反应过程中伴随的一种光辐射现象,可以分为直接发光和间接发光。直接发光是最简单的化学发光反应,有两个关键步骤组成:即激发和辐射。如A、B两种物质发生化学反应生成C物质,反应释放的能量被C物质的分子吸收并跃迁至激发态C*,处于激发的C*在回到基态的过程中产生光辐射。这里C*是发光体,此过程中由于C直接参与反应,故称直接化学发。
间接发光又称能量转移化学发光,它主要由三个步骤组成:首先反应物A和B反应生成激发态中间体C*(能量给予体);当C*分解时释放出能量转移给F(能量接受体),使F被激发而跃迁至激发态F*;最后,当F*跃迁回基态时,产生发光。
一个化学反应要产生化学发光现象, 必须满足以下条件: 第一是该反应必须提供足够的激发能, 并由某一步骤单独提供, 因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光; 第二是要有有利的反应过程, 使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态; 第三是激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放出光子, 或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。
化学发光分析测定的物质可以分为三类:第一类物质是化学发光反应中的反应物;第二类物质是化学发光反应中的催化剂、增敏剂或抑制剂;第三类物质是偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂等。这三类物质还可以通过标记方式用来测定其他物质,进一步扩大化学发光分析的应用范围。
化学发光反应的发光类型通常分为闪光型(flash type)和辉光型(glow type)两种。闪光型发光时间很短,只有零点几秒到几秒。辉光型又称持续型,发光时间从几分钟到几十分钟,或几小时至更久。闪光型的样品必须立即测量,必须配以全自动化的加样及测量仪器。辉光型样品的测量可以使用通用型仪器,也可以配有全自动化仪器。本产品针对辉光型化学发光反应进行检测。
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