发布时间:2020-09-29 11:19 原文链接: 从全血采样、保存、运输到RNA纯化

血液采集
    PAXgene系统提供标准化的BD Vacutainer(真空采血管,室温保存),配合使用一次性消毒采血针作静脉穿刺,采血管内的负压会迫使血液自动吸入管中,当搜集的血液达到2.5毫升刻度线时停止采血。采血管中本身已经预装了6.9毫升的RNA稳定试剂,拔出针头后只要将采血管轻轻颠倒8—10次将二者混匀即可。

样品保存和运输
    有许多实验需要从血液中提取RNA,这其中zui大的难题是RNA非常不稳定:研究表明在采血后的短短几个小时内RNA即迅速且显著降解,另外部分RNA在采血后受到诱导,表达增加。这种RNA降解和基因的体外诱导表达会导致在分析体内基因转录本丰度时出错,甚至低丰度的信息丢失。

    PAXgene系统中的采血管内预装的RNA稳定剂能够阻断RNA的降解以及防止体外诱导产生新的RNA转录本。混合后的血液样本可以在室温下稳定5天,在4度条件下稳定至少90天,方便样品的保存和运输。对于需要在不同时间或地点采样,背着液氮罐到处跑的研究人员来说,这是个好消息——不必担心降解而忙着作实验,可以等搜集一批样品再统一处理,提高工作效率,节约时间和精力。此前曾经介绍过的RNeasy Protect Kit 只适用于组织和培养细胞,不适用于全血,RNeasy Protect Bacteria Kit 只适用于细菌,现在这个PAXgene系统则是彻底解决全血的RNA保存和纯化的问题。

RNA纯化
    将保存的样品离心,前面提到的RNA稳定试剂包含裂解液,得到的核酸沉淀经过洗涤后重悬,加入含有蛋白酶K的裂解液进行彻底消化,离心除去剩余的杂质,上清加入乙醇后转入QIAGEN公司特别设计的RNA纯化柱,离心后RNA被吸附在特制的硅胶膜上,经洗涤出去杂质后即可用洗脱液将RNA洗脱,得到高纯度的RNA。可以用于包括定量RT—PCR、普通RT—PCR、NASBA、表达芯片分析、cDNA合成、核酶保护性分析、Northern Blot、mRNA筛选以及引物延伸等多种用途。


相关文章

中国科大团队首次揭示植物生成素“搬运工”形貌

记者15日从中国科学技术大学获悉,该校孙林峰、刘欣团队与谭树堂团队合作,在植物激素运输领域取得重要研究进展,首次揭示植物生成素“搬运工”形貌。国际学术期刊《细胞》(Cell)15日刊发了上述研究成果。......

最新!液态类食品散装运输技术规范强制性国家标准面向社会征求意见

为进一步加强液态类食品散装运输全链条管理,严防液态类食品散装运输污染风险,市场监管总局组织编制强制性国家标准《液态类食品散装运输技术规范(征求意见稿)》(以下简称《技术规范》),自4月3日至5月3日向......

事关食用油运输,强制性国家标准制定计划通知下达

9月3日,国家标准化管理委员会发布通知,向国家粮食和物资储备局下达《食用植物油散装运输卫生要求》强制性国家标准制定计划,并要求做好标准的组织起草、征求意见和技术审查工作。通知显示,《食用植物油散装运输......

2023年施行|医疗器械运输贮存服务新规范

为加强医疗器械经营监督管理,规范专门提供医疗器械运输贮存服务的企业质量管理,根据《医疗器械监督管理条例》(国务院令739号)及《医疗器械经营监督管理办法》(国家市场监督管理总局令第54号),国家药品监......

食物运输产生大量二氧化碳

国内和国际粮食运输在粮食系统中占很大比例。图片来源:CamiloFreedman/SOPA/LightRocket/Getty根据对食品行业全球碳足迹的首次全面估计,运输食材和食品的碳排放量占食品系统......

世界交通运输大会首度落户成都

大会同期还将举办交通运输科技博览会,《中国交通区块链白皮书》发布仪式,发布《在役公路隧道长期检测技术指南》等十多部标准规范,以及举行多场次服务四川省、成都市区域经济发展的签约活动等。作为国家层面倾力打......

如何操作模拟运输振动试测试仪

如何操作模拟运输振动试测试仪?模拟运输振动试测试仪的操作是很多用户非常关心的一个问题,下面海达小编针对这个问题为大家分析下模拟运输振动试测试仪的操作步骤:模拟运输振动试测试仪怎么操作?主要有五个步骤:......

家庭医疗垃圾去向:投放运输压缩各环节有隐患

专用的医疗垃圾投放桶中扔满生活垃圾,其他垃圾桶中的生活垃圾中却掺杂着口罩、医用棉、一次性手套等医疗垃圾,垃圾车清运时也是“一锅烩”。居民扔得任性,车辆运得随意,压缩站也不会进行挑拣消毒。连日来,记者走......

骨形成蛋白如何从细胞内运输到细胞外?

骨形成蛋白(bonemorphogeneticprotein,BMP)是一类重要的形态发生素,其介导的信号通路不仅广泛参与胚胎发育、器官形成、组织再生等生命过程,还与多种疾病及肿瘤发生密切相关,因此B......

研究发现细胞内囊泡运输新型调控机制

细胞内囊泡运输对于维持细胞以及机体的多种生理功能必不可少,2013年诺贝尔生理学或医学奖被授予发现囊泡转运机制的三位科学家。在真核细胞内,大约三分之一的蛋白质在内质网(ER)中折叠和修饰,然后被运送到......