发布时间:2019-11-12 16:14 原文链接: 从拟南芥菜中分离叶绿体实验

实验材料

叶组织                                                          

试剂、试剂盒

研磨悬浮缓冲液                                                          

仪器、耗材

烧杯                                                                  Polytron 匀浆器                                                          

实验步骤1. 组织匀浆

(1) 收集 10 g 叶组织,放进一 400 ml 的烧杯中。

(2) 加入 200 ml 冰冷的研磨悬浮缓冲液。在 4℃ 的房间中,用 Polytron 匀浆器进行 6~7 个 3 秒钟脉冲匀浆叶组织。

研磨重悬缓冲液:

10 mmol/L EDTA

50 mmol/L HEPES-KOH,pH 8.0

0.33 mol/L 甘露醇

0.5 g/L BSA ( 无脂肪酸)

5 mmol/L 抗坏血酸盐(用前添加)

(3) 用网层米拉布(Calbiochem) 过滤匀浆,滤液倒进 4 个 50 ml 离心管中。

2. 匀浆在 8000 g(Sorvall HB-4 转头,7000 r/min)离心一分钟。

3. 小心地倾去上清。加 1 ml 1x SH。用驼毛刷重新悬浮叶绿体,动作要轻。

4. 吸 2 ml 含 35% Pecoll 的 1x SH 到一个 15 ml 的离心管中作为缓冲层:其上覆盖重悬浮的叶绿体。13000 g(Sorvall HB-4 转头,10000 r/min)离心 3 分钟。

5. 弃去上清,沉淀用 15 ml 1x SH 洗两次,再用适当体积的 1x SH 重新悬浮。


相关文章

科学家揭示叶绿体蛋白“马达”转运机制

日前,西湖大学、西湖实验室特聘研究员闫浈团队在《细胞》上连续发表了两篇关联论文,报道了在叶绿体蛋白转运的动力机制上取得的又一重大突破——揭示了叶绿体蛋白转运的动力机制及其进化多样性,为该领域的研究开辟......

研究揭示叶绿体蛋白转运马达新功能

叶绿体是植物进行光合作用的细胞器。正常发育过程受到核基因组和叶绿体基因组在多个层次的协同调控。核质互作的分子机理是叶绿体生物发生的核心科学问题之一。光合膜蛋白复合体的反应中心亚基通常由叶绿体基因编码,......

遗传发育所玉米籽粒发育机制研究获进展

RNA编辑广泛存在于植物的线粒体和叶绿体中。RNA编辑作为一种RNA转录后加工机制,对于调控基因表达具有重要意义。RNAC-U的编辑是胞嘧啶(C)经过脱氨转变为尿嘧啶(U)的过程。在此过程中,PPR(......

植物叶绿体蛋白,治疗亨廷顿症等蛋白质病的新希望

德国科隆大学的研究人员在NatureAging期刊发表了题为:InplantaexpressionofhumanpolyQ-expandedhuntingtinfragmentrevealsmecha......

Nature:柳振峰团队发现叶绿体蛋白质传送器的组装原理

叶绿体是植物和藻类细胞中可以通过光合作用将光能转化为化学能的细胞器。作为一种由两层膜包被的特殊细胞器,叶绿体含有其自身的基因组,其表达是与核基因组的表达紧密协调的。叶绿体的蛋白质有两种来源,有一小部分......

研究发现叶绿体蛋白质传送器的组装原理

叶绿体是植物和藻类细胞中可以通过光合作用将光能转化为化学能的细胞器。作为一种由两层膜包被的特殊细胞器,叶绿体含有自身的基因组,且其表达是与核基因组的表达紧密协调的。叶绿体的蛋白质有两种来源,有一小部分......

研究发现叶绿体蛋白质传...

叶绿体是植物和藻类细胞中可以通过光合作用将光能转化为化学能的细胞器。作为一种由两层膜包被的特殊细胞器,叶绿体含有其自身的基因组,其表达是与核基因组的表达紧密协调的。叶绿体的蛋白质有两种来源,有一小部分......

研究发现叶绿体蛋白质传送器的组装原理

叶绿体是植物和藻类细胞中可以通过光合作用将光能转化为化学能的细胞器。作为一种由两层膜包被的特殊细胞器,叶绿体含有自身的基因组,且其表达是与核基因组的表达紧密协调的。叶绿体的蛋白质有两种来源,有一小部分......

柳振峰课题组等发现叶绿体蛋白质传送器的组装原理

叶绿体是植物和藻类细胞中可以通过光合作用将光能转化为化学能的细胞器。作为一种由两层膜包被的特殊细胞器,叶绿体含有自身的基因组,且其表达是与核基因组的表达紧密协调的。叶绿体的蛋白质有两种来源,有一小部分......

榕属叶绿体基因组比较研究获进展

近年来,叶绿体基因组因基因组小、突变率和重组率低的特点,被广泛用于植物系统发育、分子进化、谱系地理学的研究。榕属(Ficus)作为桑科的最大属,且是热带雨林的关键物种,而其系统发育关系仍需进一步研究。......