非靶代谢组学无偏向性检测所有内源小分子代谢物,通过全谱分析对小分子代谢物定性和相对定量,了解生物体内小分子代谢物的整体代谢特征和变化规律。基于代谢全谱的功能探究,便于从整体水平,在复杂的代谢网络中寻找潜在的重要通路,是解决复杂生物学问题的重要途经,也是许多科学研究进一步深入的前提。
可靠的检测平台和分析软件为高质量检测数据保驾护航
全谱分析技术流程
以上为代谢物全谱分析的基本流程,下面我们开始细述各类细节。
1、 样本保存
离体样本必须在液氮速冻后-80℃保存,严禁反复冻融。
2、 样品前处理
在代谢组学研究中,最常用的样本前处理方式是有机溶剂沉淀蛋白,接着使用高速离心或者超滤技术移除沉淀。研究者们喜欢用有机溶剂例如甲醇进行一步提取,既缩短前处理时间,又可以避免过多的杂质混入,缩短色谱柱寿命,影响检测结果。在某品牌眼药水全谱分析过程中,代谢物提取步骤为加甲醇涡旋、静止、离心和过滤收集上清。
3、 代谢物检测
LC-MS、GC-MS或核磁共振对代谢物进行定性和定量检测,如Thermo, Ultimate 3000LC +Thermo Scientific™ Q Exactive™ HF液质联用仪,以液相色谱作为分离系统,质谱为检测系统,样品在质谱部分和流动相分离,被离子化后,经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开,经检测器得到质谱图,获得原始数据。
4、 离子流图
(ESI+)表示正离子检测模式,即在检测过程中质量分析器只扫描正电荷离子而滤除负电荷离子,从而获得正电荷离子的信息;(ESI-)表示负离子检测模式,原理同正离子模
5、数据预处理
数据处理的软件众多,针对Thermo Scientific™ Q Exactive™ HF原始数据对应专门分析软件Compound discoverer 3软件,可对LC/MS检测数据进行提取和预处理,整理成二维数据矩阵形式,包含保留时间RT(Retention time)、分子量(Molecular Weight)、观察量(样本名称)、峰强度等信息,进行后续去全谱鉴定。
6、 全谱鉴定
根据LC-MS产生的二级质谱图或者Mass值基于mzCloud数据库和网络数据库Metlin进行全谱鉴定,对代谢物注释和分类。例如某品牌眼药水的全谱分析鉴定其主要包括亚油酸及其衍生物、脂肪酸及其衍生物、氨基酸及其衍生物和吲哚基羧酸及其衍生物等。
全谱分析技术优势
全谱分析应用
代谢物全谱分析可广泛应用于农业、医疗和生产各个领域中,丰富的样本前处理经验,高通量的质谱检测和专业的数据处理分析,可高效准确地获取全谱分析结果。
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1.EDS与XPS的相同点:两者均可以用于元素的定性和定量检测。2.EDS与XPS的不同点:1)基本原理不一样:简单来说,XPS是用X射线打出电子,检测的是电子;EDS则是用电子打出X射线,检测的是X......
全谱分析所得到的信号比较粗糙,只是对元素进行粗略的扫描,确定元素有无以及大致位置。对于含量较低的元素而言,信噪比很差,不能得到非常精细的谱图。通常,全谱分析只能得到表面组成信息,得不到准确的元素化学态......
全谱分析一般用来说明样品中是否存在某种元素。比较极端的,对于某一化学成分完全未知的样品,可以通过XPS全谱分析来确定样品中含有哪些元素(H和He除外)。而更多情况下,人们采用已知成分的原料来合成样品,......