使用全自动凯氏定氮仪测定食品中的蛋白质含量

　　蛋白质是生命的物质基础，是构成人体及动植物细胞组织重要成分。蛋白质在人体内有构成新生组织及制造体内氧化还原所需的酶和激素等生命基础物质的用途及作用。食品中的蛋白质含量的多少，不仅表示食品的质量，而且也关系着人体健康，因此食品中对蛋白质的含量有一定规定。食品蛋白质含量测定方法常有，凯氏定氮法、酚试剂法、双缩脲法、及紫外吸收法等。但存在操作比较繁琐、费时或费力。目前我们采用的是基尔特克（DIGESTOR.2006）消化装置，全自动凯氏定氮仪测定食品中的蛋白质。

　　它不仅省时省力、而且数据准确可靠，便于检测和分析研究。下面谈谈我们使用该仪器的一点体会。

　　1.材料与方法

　　1.1 仪器与试剂

　　1.1.1 2300 型全自动凯氏定氮仪（瑞典 FOSS.TECATOR 公司生产）。

　　1.1.2 样品消化炉（瑞典 FOSS TECATOR.DIGESTOR.2006 型）。

　　1.1.3 400g/L 氢氧化钠溶液，称取 4000g 氢氧化钠溶于 10L 水。

　　1.1.4 0.1042mol/L 盐酸标准液。

　　1.1.5 含溴甲酚绿和甲基红的 1%硼酸吸收液。取 100g 硼酸溶于 10L 蒸馏水添加 7:10 甲基红、溴甲酚绿混合指示剂约 28ml（根据实际情况酌情处理）1.1.6 基尔特催化片（每片含 3.3gk2so4+0.4gCuso4.5H2O）1.1.7 浓硫酸（GR 或 AR）。

　　1.2 样品制备称量

　　1.2.1 固体样品：将样品磨细均匀称取 0.2-2.0g。

　　1.2.2 半固体样品糊状样品：摇匀称取 0.5-2.0g。（*对含糖量较高、水分多样品先放入消化管在 120C0消化器蒸至近干后消化。防止发泡、爬壁、粘贴现象。）

　　1.2.3 液体样品：摇匀取 1.0-10.0ml.（*同上）1.3 样品测定。将称取样品置入消化管，加消化片两片，加 12ml 浓硫酸慢慢摇动将样品润湿。把消化管放入已预热至 4200C 的消化器中，消化 60 分钟，样品消化呈透明绿色液体。取出冷却 10-15 分钟，将消化管放入 2300 型自动凯氏定氮仪中。加水 80ml、氢氧化钠 50ml、吸收液 30ml。关上安全门待仪器自动蒸馏、滴定、计算并打印结果。

　　2. 结果与讨论：

　　2.1 精密度测定。各取国家实验室认可比对样品（CNAC-TO186.大豆样品 A）5 份，用经典方法和全自动凯氏定氮仪做对比试验。

　　结果见表 1

　　两种方法精密度比较 表 1

　　上述表 1 测定结果表明仪器法的相对标准偏差比经典方法小，仪器法的精密度明显比经典化方法好。RSD<1%，即表明 2300 型全自动凯氏定氮仪的精密度好。

　　2.2 T 检验：对表 1 的数据作 t 检验分析，两种分析方法总体均数无显着差异（t0.05），两种方法测定食品中蛋白质含量不存在显着性差异。

　　2.3 准确度：根据 2003 型全自动凯氏定氮仪仪器要求，精确称取 GR 硫酸铵（99.9%（NH4）2SO4）若干克置入消化管内，加 75ml 蒸馏水和 50ml40%NaOH 溶液。在 FOSS2003 型全自动凯仪上直接进行蒸馏、滴定，对仪器氮的回收率进行验证。见表 2计算方法：氮%=回收率%= x100

　　氮的回收率 表 2

　　表 2 表明 FOSS2003 型全自凯氏定氮仪回收率在 99%以上，准确度良好，符合检验要求。

　　3. 部份食品中蛋白质含量测定结果。（见表 3）

　　这批样品蛋白质含量达标为 88%，测定结果比较满意。（表 3 测定结果均为平均值，不达标样品进行复检。）

　　部份食品中蛋白质测定结果 表 3

　　4.小结：

　　全自动凯氏定氮仪（仪器法）是在化学分析的基础上的改进，测定原理两者相同。相当于玻璃仪器整合，并且机电一体化控制。具有操作简便、快速、准确度高、精密度好等特点。它与经典方法比较，减少了人为操作误差因素的影响，测定蛋白质结果令人满意，可作为优选方法使用，具有推广价值。