1、肾功能不全、肝功能异常、前庭功能或听力减退者、失水、重症肌无力或帕金森病及老年患者慎用。
2、注射用硫酸妥布霉素1个疗程不超过7～14日。
3、交叉过敏：对一种氨基糖苷类抗生素如链霉素、庆大霉素过敏的患者，可能对本品过敏。
4、对患者(尤其对肾功能减退者、早产儿、新生儿、婴幼儿或老年患者、休克、心力衰竭、腹水或严重失水等患者)应注意监测：
(1) 听电图：对老年患者须在用药前、用药过程中定期及长期用药后用以检测高频听力损害；
(2) 温度刺激试验：在用药前、用药过程中定期及长期用药后用以检测前庭毒性；
(3) 尿常规检查和肾功能测定，在用药前、用药过程上中定期测定肾功能，以防止严重肾毒性反应。
(4) 在用药过程中应注意监测本品的血清浓度，一般于静脉滴注后30分钟到1小时测血清峰浓度，于下次用药前测血清谷浓度，当峰浓度超过12μg/ml、谷浓度超过2μg/ml时易出现毒性反应。
5、肌酐清除率在70ml/分钟以下者其维持剂量须根据测得的肌酐清除率进行调整。
6、注射用硫酸妥布霉素静脉滴注时必须经充分稀释。可将每次用量加入50～200ml5%葡萄糖注射液或氯化钠注射液稀释成浓度为1mg/ml(0.1%)的溶液，在30～60分钟内滴完(滴注时间不可少于20分钟)，小儿用药时稀释的液量应相应减少。
7、注射用硫酸妥布霉素不能静脉注射，以免产生神经肌肉阻滞和呼吸抑制作用。不宜皮下注射，因可引起疼痛。
8、长期应用注射用硫酸妥布霉素可能导致耐药菌过度生长。
9、应给患者补充足够的水分，以减少肾小管损害。
10、对实验室检查指标的干扰：本品可使丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、血清胆红素浓度及血清乳酸脱氢酶浓度的测定值增高；血钙、镁、钾、钠浓度的测定值可能降低。