使用流式细胞仪检测病毒

　　流式细胞术是一种通常用于从混合样品中识别和分离特定细胞的技术。这种技术可以应用于大量的样品筛选，这对于进一步的统计分析是非常理想的。流式细胞仪已用于检测病毒，该技术被人们称为“流式病毒仪”。

　　此外，流式细胞术已被用于根据感染性的不同对病毒颗粒进行分类，以及检测被病毒感染的细胞。

　　“流式病毒分析”是如何发展成为一种技术的？

　　流式细胞仪通过测量细胞通过激光束时的光散射和发出的荧光来测量单个细胞。最初认为通过流式细胞技术无法检测到明显小于细胞的病毒。

　　但是，通过修改流式细胞仪并使用较小的体积进行观察，可以通过流式细胞技术检测病毒。这项技术早在2013年被科学家称为“流式病毒分析”。

　　使用流式细胞技术成功检测到病毒的第一个例子是T2噬菌体，其宽度为70nm，长度为200nm。在这些早期研究中，病毒颗粒固定在戊二醛或甲醛中。随后，还通过这种流式细胞仪检测了痘病毒和固定的T4噬菌体，并将该技术进一步应用于检测和计数海洋样本中的病毒。

　　样品处理必须格外小心，包括固定和标记病毒的步骤，以及加热以改善染料渗透性的步骤。

　　在最初的研究中，有些病毒被证明更难检测，例如球形呼肠孤病毒。然而，近年来，使用流式细胞技术检测病毒已变得越来越普遍，并且可以通过流式细胞术检测的病毒范围已扩大到包括λ噬菌体，单纯疱疹病毒，小鼠肝炎病毒，人类免疫缺陷病毒（HIV） ），尼帕病毒，朱宁病毒，牛痘病毒，登革热病毒和人巨细胞病毒。

　　流式病毒测定方法举例

　　在一项研究中，布鲁萨德（Brussaard）使用流式细胞仪检测多种病毒；其中包括HIV，单纯疱疹病毒和脊髓灰质炎病毒。将这些病毒与适当的宿主细胞一起培养，然后将感染的细胞裂解。

　　通过离心从细胞裂解物中部分纯化了一些测试的病毒，包括HIV和单纯疱疹病毒。然后将样品用戊二醛固定，然后使用液氮冷冻。

　　然后用各种靶向核酸的荧光染料对固定的病毒样品进行染色，SYBR Green I，SYBR Green II，OliGreen和PicoGreen。然后将样品通过带有氩离子激光器的流式细胞仪。

　　研究表明，SYBR Green I的荧光强度最高，通过这种流式病毒测定法可以检测到DNA基因组为48.5至300千碱基的病毒。能够在检测极限时检测到具有较小RNA基因组的病毒。此外，研究表明该方法可以区分不同的病毒。

　　如何使流式病毒技术在研究中受益？

　　流式细胞仪的发展使得可以检测胞外囊泡，这也有属于流式病毒测定领域。流式细胞仪的一种适应方法是增加激光的功率，这有利于检测病毒以及囊泡。如果样品中元素的波长小于所用光的波长，则样品不能很好地折射光。通常，流式细胞仪使用10至20mW的激光器，但使用300mW的激光器意味着可以避免上述问题。

　　病毒和细胞外囊泡的一个共同特征是它们的体积小，这意味着光子分布更广泛。大多数流式细胞仪通过检测前向光散射来测量细胞大小，通常覆盖范围为0.5˚至15˚。然而，从较小的病毒或外来小泡中散射的大部分光都不会被检测到。流式细胞仪的适应性可以检测15˚至70˚之间的光，而阻挡0.5˚至15˚的光，这在流式病毒测定技术的发展中很有用。

　　可以通过流式细胞仪检测病毒的感染性吗？

　　研究表明，病毒颗粒上某些脂质或蛋白质的存在及其丰富程度与病毒颗粒的感染性有关。高丁公司研究了流式细胞仪是否可用于检测单个Junin病毒颗粒的差异。

　　他们发现病毒颗粒的大小和膜糖蛋白的浓度与病毒颗粒的感染性之间存在相关性。这可以通过在流式细胞仪分析之前标记膜糖蛋白来实现，这可以根据病毒的感染力来区分病毒颗粒。

　　可以使用流式细胞技术检查细胞是否已被病毒感染吗？

　　在一项研究中，Sivaraman和他的同事研究了是否可以使用特定的细胞标记物鉴定脊髓灰质炎病毒感染的细胞。在这里，使用了TAT肽衍生的分子信标，该信标被传递到受感染的细胞中，并将其与流式细胞仪相结合，他们能够鉴定出脊髓灰质炎病毒感染的细胞。这有可能被进一步开发为快速诊断病毒感染的工具。