NASBA的简要过程如下：1.RNA模板链进入反应混合物后，第一个引物首先与模板链的3'端结束。2. 反转录酶，合成反义的补偿的DNA链。3. RNA 酶H（一种核糖核酸内切酶，能够特异性地水解杂交到DNA链上的RNA磷酸二酯键，分解RNA/DNA杂交体系中的RNA链，但不能消化单链或双链DNA），分解破坏RNA模板链。4.第二个引物与DNA的5’端结合。5.T7 RNA polymerase 合成RNA补偿链，并加入到步骤1中，使反应可以循环进行。NASBA技术已经被用于多个单链RNA基因组的病原性病毒的快速检测试验中。
标准的NASBA 反应体系中含有T7RNA聚合酶（一种RNA聚合酶，分子量约99kDa，专门催化5'→3'方向的RNA形成过程）、RNA se H（一种逆转录酶，可以消化mRNA）、禽骨髓白血病病毒（AMV）逆转录酶、核糖核苷三磷酸（NTP）、脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）、一对特殊引物及根据需要使用的各种反应缓冲液等。引物P1 长约45个碱基，其3’末端大约20 个碱基对与模板的3’末端互补，5’末端含有能被T7 噬菌体RNA 聚合酶识别的启动子序列；引物 大约20个碱基长，其序列与模板的5’末端一致。AMV 的作用是以单链RNA 为模板合成互补的cDNA 及以cDNA 为模板合成双链DNA。RNAseH 在体系中的作用是将RNA-cDNA 杂合分子中的RNA 降解，T7 噬菌体RNA 聚合酶则是识别双链DNA 中的启动子区，催化DNA 转录为RNA。