93年前,时任红一方面军第一军团第三军军长的黄公略在江西省吉安市青原区东固畲族乡六渡坳指挥部队转移时,遭敌机袭击壮烈牺牲。近年,疑似黄公略烈士遗骸在江西省吉安市青原区东固畲族乡出土。复旦大学科技考古研究院文少卿团队在经历7个多月的DNA鉴定后,最终确认其为黄公略烈士遗骸。9月25日,黄公略烈士遗骸在江西省吉安市东固革命烈士陵园安葬。
这项艰巨的鉴定工作始于2年前。“在DNA技术鉴定中,一般从颞骨与牙齿提取DNA,我们拿到的样本并不是质量最好的检材。更麻烦的是,遗骸的出土地点在江西,当地土壤是酸性红壤,导致样本保存质量不够好。”文少卿介绍道。
图片由复旦大学提供。
根据质量评估,疑似黄公略样本的全基因组测序文库中,人源内源性极低,人的DNA含量仅为总DNA含量的千分之一到千分之二左右,提取的DNA片段长度只有约80bp,且存在末端损伤,说明样本埋藏有一定年代、保存状况不佳。
于是,文少卿团队决定采用Y染色体谱系鉴定的方法,即将Y染色体多重PCR应用于黄公略疑似样本及与黄公略属于同一父系的亲属,确定其是否来自相同Y染色体单倍群。如果是,使用Y染色体全序探针捕获测序对现生黄公略父系家属进行Y染色体测序,结合复旦Y全序数据库和ISOGG数据库等,获得Y染色体下游罕见突变。基于这些位点设计Y染色体捕获探针,对黄公略疑似样本进行捕获测序,确定其是否携带这些下游罕见突变,判断是否属于同一晚近父系家族。
经鉴定Y染色体多重PCR检测结果显示,疑似黄公略样本与黄公略的父系亲属同属于Y染色体单倍群O2a1b1a1a1a1-F325。统计复旦Y染色体精细分型数据库(涵盖20000条数据)中O2a1b1a1a1a1-F325的人群频率为9.5%,求得随机匹配概率为0.9025%,非父排除率为99.0975%。随后,团队对样本进行Y染色体捕获验证,发现疑似黄公略样本与黄公略同一父系家属共享所有检出的罕见突变,非父排除率大于99.999%,疑似黄公略样本与黄公略现生父系亲属属于同一晚近父系家族。
为保证结果的准确性,研究团队做了进一步的复杂亲缘关系鉴定。通过对疑似样本与黄公略二级亲属的全基因组文库进行1240K探针杂交捕获测序,验证两者是否存在二级亲缘关系。
这套1240K捕获方案包含了1233013个SNP位点,被广泛应用于人类古DNA起源迁徙、人群混合、亲缘关系等研究。通过对全基因组水平成功捕获的123466个SNP位点进行分析,确认黄公略疑似样本与黄公略外孙张忠为二级亲缘关系。
历时七个多月,通过Y染色体谱系鉴定和复杂亲缘关系鉴定叠加,团队终于将鉴定结果提升至法庭效力水平。
据悉,文少卿团队一直致力于用科技考古手段为烈士寻亲。近9年来,他们从吕梁战役、滇西保卫战、长沙会战、平遥遭遇战、高台战役、淮海战役等烈士遗骸中,已累计收集了1千多位无名烈士的DNA样本,有望助力更多像黄公略一样的革命英雄回家。
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