偶氮萃取柱的操作问题解析

　偶氮萃取柱的操作问题解析

　　1.装柱

　　柱子下的活塞避免使用润滑剂，以免被淋洗剂带到产品中。干法和湿法装柱区别较小，只要能把柱子装实即可。装柱前应仔细观察固相萃取柱是否开裂，避免影响分离效果，装柱应该要适度紧密（太紧密淋洗剂流速太慢，太疏松淋洗剂流速过快）、均匀（避免样品从一侧斜着流出），避免过柱时出现大量的气泡。

　　2.加样

　　用少量的溶剂溶样品加样，打开活塞，待溶剂层下降至石英砂面时，再加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此三次，一般石英变成白色。加入淋洗剂后不可立即加压，等溶样品的溶剂和样品层有分开2-4cm，再加压，这样可以避免溶剂夹带样品快速下行。

　　3.样品的收集

　　用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡过程。如果样品与硅胶的吸附较强，样品解析较慢。这样就会出现后面的点先出，而前面的点后出的现象，这时可以采用氧化铝作固定相。另外，收集的试管大小要以样品量而定，特别是小量样品，如果用大试管，可能一根就收到了多个样品，如果都用小试管，缺点是工作量太大。

　　4.后处理

　　偶氮萃取柱分离后，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会积累到所需组分中，必要时进行重结晶。另外，过柱时有时会出现气泡，这可能存在两种原因：这与使用的溶剂类型有关，如果是易挥发的溶剂，如二氯甲烷等，在室温稍高的情况下，很容易出现这种现象。因此，在室温高的时候，应该选择沸点较高，挥发性相对小的溶剂。

　　偶氮萃取柱的清洗：

　　以5ml适当极性的溶剂洗脱吸附样品的萃取柱（常用的有纯水,缓冲液,水/有机溶剂混合液）；

　　以5ml适当非极性的溶剂洗脱吸附样品的萃取柱；

　　以5ml去离子水/或低离子强度的缓冲液淋洗萃取柱。