光学显微镜检测肿瘤细胞形态实验

实验方法原理

吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。

1）嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；

2）细胞核蛋白和淋巴细胞 胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；

3）中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均分布蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色 偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用玻片必须清洁，无酸碱污染。配制必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。

用途：适合大多数细胞组织的染色，包括血涂片、各种组织石蜡切片、冰冻切片、以及各种培养细胞。染色体显带、多种微生物的鉴别染色和细胞凋亡的检测等。

实验材料 肿瘤细胞

试剂、试剂盒 甲醛二甲苯Gimsa染液Sorensen磷酸缓冲液香柏油蒸馏水

仪器、耗材 光学显微镜树胶载玻片盖玻片洗瓶离心机离心管

实验步骤

一、试剂配制

1.  瑞氏染液配制

称瑞氏染料0.1 g于研钵，少量多次加入AR级甲醇至完全溶解，后补充至60 ml棕色瓶密封保存，可加3 ml甘油防止挥发。

2.  吉姆萨染液配制

0.1 g吉姆萨染料放入有6.6 ml甘油的圆锥烧瓶内，56度，水浴90-120 min，当染料与甘油充分混合后加入6.6 ml甲醇，充分摇匀后过滤，棕色瓶室温可保存一周。

二、染色

1.  收集细胞制成悬液后涂片、晾干。悬浮培养细胞离心收集。贴壁细胞可直接培养在载玻片上。组织取材需机械零散。

2.  固定：以甲醇固定10 min.

3.  液化精液2 000/ rmin 离心10 min，等渗盐水洗3遍，涂片后自然干燥。

4.  临用前，瑞、吉染液按10：1混合，染色30-60 s。

5.  加等量PBS（pH6.9），再染10 min。

6.  自来水冲洗，自然干燥后，即可镜检，也可直接香柏油兼做透明与封片。