免疫学方法（ELISA法）检测细胞凋亡

细胞凋亡事件发生时，会出现蛋白质和核酸分子结构的改变，形成新的表位。利用免疫学方法对这些表位进行鉴定，有助于判断样本中细胞凋亡事件的发生。
细胞凋亡的发生，是由于内源性核酸内切酶的激活，这种钙和镁依赖性核酸酶容易进入的核小体间区解开双链DNA，产生单/低聚核小体片段，而核小体本身由于DNA与组蛋白H1、H2A、H2B、H3和H4形成紧密复合物而不被核酸内切酶裂解。采用双抗体夹心酶免疫法，应用小鼠抗DNA和抗组蛋白的单克隆抗体，与核小体片段形成夹心结构，可特异性检测细胞溶解物中的单/低聚核小体，从而判断细胞是否发生凋亡。
【材料与试剂】
（1） 生物素标记的小鼠抗-组蛋白单克隆抗体；
（2） 过氧化物酶（-POD）标记的小鼠抗DNA单克隆抗体；
（3） 链霉亲合素包被的微孔板；
（4） DNA-组蛋白复合物，作为阳性对照；
（5） ABTS底物；
（6） 溶解缓冲液；
（7） 温育缓冲液；
底物缓冲液；
培养细胞或离体细胞的裂解物（细胞裂解步骤：收集细胞，离心后，用200μl溶细胞缓冲液重新悬浮，室温下作用30min）；
培养细胞的上清液；
血浆（血清）；
分光光度计
【操作步骤】
（1） 取样品离心后（1000r/min， 10min），吸取20μl上清液，加入链霉亲合素包被的培养板孔中；
（2） 另加入80μl免疫反应试剂：含抗-DNA-POD、抗组蛋白-生物素及温育缓冲液（按1:1:18混合），室温下孵育2h（置摇床上，250r/min）；
（3） 弃上清，用300μl温育缓冲液洗涤3次，小心移去洗涤液；
（4） 加入100μl底物缓冲液，室温下孵育至颜色变化至适合（置平板摇床上）；
【结果判断】
尽快作比色分析（10～20min内），用底物缓冲液作空白对照，检测波长405nm，参考波长492nm。

聚集值
=
样品的mU（诱导凋亡处理的细胞）
×
100

对照的mU（未经诱导凋亡处理的细胞）

注：mU=吸收值（10-3）=双孔吸收值的平均OD值-底物OD值，若样品的吸收值超过比色测定范围，应适当稀释后再检测。