免疫电镜标本固定实验

实验方法原理

实验步骤

1. 血管灌注固定固定效果最好，能使超微结构得到很好的保存。灌注装置由加压气球、压力表、三通接头和连接管道组成。不同的组织器官必须选择合适的灌注压力，详见有关书籍。灌注固定一般维持 10～15 min。然后用相同的固定液继续浸泡固定 2～4 h。

2. 浸泡固定组织块切小后立即投入到固定液中，置于 4℃ 固定 2～4 h。游离培养细胞离心后去上清，加入 20 倍体积的固定液，用吸管将细胞团块打散，固定 25～30 min。

3. 微波固定微波能加速组织内部分子、外部化学物质的运动和扩散。应用微波照射可以缩短固定时间，而且抗原能得到较好保存。一般 700 W 微波照射 10 s，在微波炉内放 1000 ml 的冷水以吸收热量（保持温度在 35℃ 以下），然后继续用固定液固定 2～4 h。

注意事项

其他

目前常用免疫电镜标本固定液主要有以下几种。

1. 多聚甲醛-戊二醛混合固定液（简称 PG 固定液）推荐用 2％～4％ 多聚甲醛与 0.5％ 戊二醛的混合液，固定时间为 4 h。

2. 过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛混合固定液（称 PLP 固定液）配制方法见本书第一章，固定时间为 6～12 h。该固定液选择性地固定糖类，对超微结构及许多抗原的活性保存较好。低浓度的多聚甲醛能稳定蛋白与脂类。

3. 苦味酸-多聚甲醛-戊二醛固定液（称 PAPG 固定液）含 4％ 多聚甲醛、15％（体积分数）苦味酸（2，4，6，-三硝基苯酚）、0.5％ 戊二醛，pH 7.3。苦味酸穿透力强，对抗原活性影响小。在前固定液中加入苦味酸替代锇酸，能固定蛋白质，改善对膜和胞质的保存。

常用于包埋后的免疫染色。