免疫组织化学常用的检测方法

  免疫组织化学（immunohistochemistry）技术的基本原理是抗原-抗体的反应。利用带有标记物（如荧光素或辣根过氧化物酶等）的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。

免疫组织化学常用的检测方法有ABC法、SP法等，这些方法的工作原理大同小异：

1.ABC法：首先按一定的比例将亲和素与酶标的生物素结合在一起，形成亲和素-酶标生物素复合物，即ABC复合物。*抗体不被标记，以生物素标记第二抗体，标记的二抗与复合物结合。染色步骤依次为*抗体、生物素标记的第二抗体、ABC复合物，zui后进行酶显色反应。由于亲和素对生物素有极强的特异性结合力，具有多价性，产生多级放大，从而提高了生物反应的敏感性和特异性。

2.SP法：染色步骤依次为*抗体、生物素标记的第二抗体、酶标记的亲和素，zui后进行酶显色反应。Vectorlabs公司的SP法试剂盒，可进行快速染色（15分钟），具有同ABC试剂盒同样的优点，操作过程更为简单。

3.非生物素-亲和素方法：免疫组化染色实验过程中，在选择使用生物素-卵白素或生物素-链霉菌卵白素检测系统时(如ABC、LSAB、SP法)，由于有些组织和器官 ,如肝、肾、脑、胰、乳腺、脂肪、子宫内膜和骨骼肌组织等(如腺上皮组织)内源性生物素含量比较高，特别在

    使用高温加热修复方法暴露抗原决定簇后，组织内源性生物素大量暴露，容易造成假阳性。Vectorlabs公司开发的ImmPRESS超敏聚合酶-抗体检测试剂，具有快速、敏感和背景清晰等特点。其原理是：采用新的聚合酶方法，将多个酶分子通过化学键偶联至有机物骨架上形成酶聚合物，再与抗体偶联，从而减少操作步骤，节省了时间。并避免了传统的以右旋糖酐或其它高分子材料为骨架所导致的空间位阻以及生物素-亲和素内源性干扰的不足。

4.免疫荧光：免疫荧光技术的原理基本相同，只是用荧光素作为显色系统。使用荧光标记抗体，直接定位、定性检测组织或细胞蛋白表达情况。较免疫组化具有灵敏度高、操作简单的优点。缺点是染色组织片不能长期保存。

5.免疫双重或多重标记法：用不同颜色的荧光素或酶，来标记不同的抗原；（1）使用相同的酶系，选用不同的底物来检测每一个抗原；（2）使用不同的酶系，选用其相应的底物来检测每一个抗原。