免疫细胞化学技术观察细胞成分实验

细胞

福尔马林 丙酮 多聚甲醛

盖玻片 培养瓶 培养板

一、标本制备

细胞可直接培养在盖玻片上、培养瓶内或培养板上，也可将一定量的细胞收集离心制成涂片。

二、固定和固定制

对于活细胞标本，常用的固定剂有以下几种。

1.  福尔马林类

10 %福尔马林或10 %中性福尔马林，其中以10 %中性缓冲福尔马林固定效果最好，最为常用。

2.  丙酮类

纯丙酮固定效果好，对抗原的影响也较小，95 %乙醇的固定效果与丙酮相似但不如丙酮好。如在乙醇中加入1 %冰醋酸可增强固定效果，加入少量氯仿可有利于抗体的穿透。

3.  4 %多聚甲醛类

将多聚甲醛40 g溶于0.1 M PBS 1000 ml，加热至60 ℃左右，边搅拌边加温至透明为止（一般需滴加少许1 M NaOH才能使溶液清亮）。该固定剂较温和，适于标本的较长期保存。

目前尚未发现一种通用的固定剂，对各种不同的抗原都有满意的固定效果。比较而言，中性缓冲甲醛是适用性较广的一种固定液。必要时，可用多种固定液作比较，从中挑选出对某种抗原效果最好的固定液。

1.  活细胞标本制备好后应立即固定，以防止细胞自溶，保持其固有的组织结构，保存细胞内的抗原性，使抗原不失活，不发生弥散和保证免疫组化定位准确。标本固定后必须彻底清洗、除去多余的固定液，否则将影响免疫组化染色效果。

2.  一般固定剂以室温（22℃）为宜，某些酶的固定，要求在37 ℃下进行。固定时间因固定剂、温度及抗原成分等因素的不同而异。时间过短，固定不充分，影响抗原保存的完好性，但也不是越长越好，时间过长亦会对抗原、细胞形态有影响，从而影响免疫组化效果，所以应该掌握适当。固定时间：酒精、丙酮5～15 分钟，多聚甲醛3～5分钟，福尔马林10～15 分钟。