免疫酶染色试验

实验方法原理

免疫酶染色试验 (immunoenzymatic staining test, IEST) 是用酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）标记已知抗体或抗原，与相应抗原或抗体结合，形成酶标记抗体－抗原复合物，复合物中的酶在遇到相应的底物时，能催化底物产生颜色反应，根据有色产物的有无及其浓度，即可间接推测被检抗原或抗体是否存在及其含量，从而达到定性或定量的目的。

实验材料 EB 病毒细胞抗原片

试剂、试剂盒 辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的马抗人 IgA抗体

仪器、耗材 玻片

实验步骤

(1) 首先将保存的 EB 病毒细胞抗原片，移于室温，吹干。

(2) 每孔内滴加 0.01mol/L PBS(pH 7. 4) 稀释的待检血清（每个标本加 1 孔），同时分别加1 :10 稀释的 EB 病毒 VCA IgA 抗体阳性和阴性血清各 2孔做为对照，移入湿盒中置 37℃温育30 min 后，用 PBS 液洗 3次，每次 5 min 。

(3) 每孔内滴入用 PBS 液作适当稀释的 HRP 标记的马抗人IgA 抗体，放入湿盒后，置 37℃温育 30min, 再用 PBS 液洗 3 次，每次 5min 。

(4) 将细胞片浸入酶底物内约 4 min, 在反应结束后，用蒸馏水漂洗 1 次，吹干并镜检。

3. 结果判断 在普通光学显微镜下阳性细胞为棕褐色，阴性细胞白色透明不显色。

注意事项

其他

IgA抗体：使用时用 0. 01 mol/L pH 7. 4 PBS 作适当稀释 ，酶底物溶液：称取 3 3'-二氨基联苯胺 50 mg 溶于 0. 05 mol/L Tris-HCl 缓冲液 (pH 7.6)100 ml 加 3%H2O2 0.1ml