在复合物体系中连接更多的PAP复合物，来进一步放大抗原，从而使灵敏度更为增强，适用于检测微量抗原。
实验方法：
将固定后的标本用PBS漂洗；
2. 于室温下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min，用来密封内源性过氧化物酶；
3. PBS漂洗2次，每次3min；
4. 在室温下用二抗的正常血清孵育20min；
5. 滴加一抗后在室温下放置1h或4℃冰箱内过夜；
6. PBS漂洗3次，每次3min；
7. 滴加二抗后于室温放置30min；
8. 重复步骤6；
9. 加PAP复合物，室温60min；
10. 重复步骤6；
11. 第二次滴加酶标二抗；
12. 用PBS液反复漂洗；
13. 第二次加PAP复合物；
14. 重复步骤12；
15. 将标本置于0.04%DAB+0.03%H2O2的溶液中显色5~10min；
16. 用苏木精复染后封片，镜检。