兔出血症病毒(RHDV)酶联免疫分析

兔出血症病毒(RHDV)酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

                                                                     96T

使用目的：

本试剂盒用于测定兔血清、血浆及相关液体样本中出血症病毒(RHDV)表达。

 上海裕平生物科技公司高品质ELISA试剂盒供应商，品质卓越，价格实惠，售后完善，并提供免费代检测服务。
咨询热线：021-60545848-55123867  手机:18721526660-18721505559     传真：021-55123867

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔出血症病毒(RHDV)表达。用纯化的兔出血症病毒(RHDV)抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中出血症病毒(RHDV)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的出血症病毒(RHDV)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中兔出血症病毒(RHDV)的存在与否。

试剂盒组成

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.         编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.         加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.         温育：操作同3。

8.         洗涤：操作同5。

9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算和结果判定：

  试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

  临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

  阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为兔