全自动生化分析仪单一检测项目失控的原因分析

生化检验作为临床检验医学的一个重要分枝，随着检验技术与仪器的发展，检验项目越来越多，检验速度不断加快，而且检验质量控制也更容易。然而，在实际仪器分析过程中，单一项目失控在原因分析中往往会走进误区。众说周知，对失控的判断标准有许多不同的主张，目前采用最广泛的原则是当质控血清的某一检验项目的检验结果超出±3s时即判为失控。在寻找失控原因时，往往采用如下步骤去寻找原因：(1)立即重测定同一质控品。此步主要是用以查明人为误差和偶然误差。如果重测结果仍不在允许范围，则可以进行下一步操作。(2)新开一瓶质控品，重测失控项目。如果新开的质控血清结果正常，那么原来那瓶质控血清可能过期或在室温放置时间过长而变质，或者被污染。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。(3)进行仪器维护，重测失控项目。检查仪器状态，查明光源是否需要更换，比色杯是否需要清洗或更换?对仪器进行清洗等维护。另外还要检查试剂，此时可更换试剂以查明原因。如结果仍不在允许范围，则进行下一步。(4)重新校准，重测失控项目。用新的校准液校准仪器，排除校准液的原因。(5)请专家帮助。如果前五步都未能得到在控结果，那可能是仪器或试剂的原因，只有和仪器或试剂厂家联系请求他们的技术支援了。本文根据本实验室在质量控制方面的经验探讨全自动生化分析仪单一检测项目失控原因的分析方法。

1 材料与方法

       1．1 仪器与试剂  Olympus AU1000型全自动生化分析仪，该仪器有三个搅拌系统，其中仪器搅拌系统Ⅱ：搅拌1试剂(R1)和血清样品的混合物；仪器搅拌系统Ⅲ：在2试剂(R2)加入后搅拌整个反应体系。试剂：ALB(BCG法)、Glu(HK法)、Tg(酶试剂法)等均为上海申能公司生产。Moni-Trol 低、高值质控血清批号分别为M5106-1和M5106-2。所有试剂和质控血清均在有效期内使用。
       1．2 失控现象  ①ALB失控，ALB检测结果偏低，其它检测项目在控(±2s)；②Glu失控，其它检测项目在控。③Tg低值质控血清失控，高值质控血清假性在控，其它检测项目在控。
       1．3 失控原因分析与查找方法[1-2]①质控血清因素，②试剂因素，③仪器因素，④其他因素。

2 失控原因分析结果

       2．1 ALB失控  测定ALB所用试剂批号均相同，质控血清也与前几天相同均为分装后在—25℃冰箱冻存。更换质控血清或试剂后测定结果仍偏低。在L—J质控图上观察前几天ALB测定结果无趋向变化或曲线漂移均在控。以上表明失控是由突然发生的误差造成。排除了质控血清、试剂等因素，由仪器造成的失控可能性最大。查看其反应曲线，正常情况下ALB应在1分钟内反应至终点(图1)，而实际反应曲线有两个平台期(图2)，提示试剂加入后，再加入血清样品后混匀不充分，检查仪器的搅拌系统Ⅱ，在仪器运行时不搅拌，检查其线路有断路，修复后运转正常。再测定质控血清的ALB，结果在控。

       2．2 Glu失控  在L—J质控图上观察前几天Glu测定结果无趋向变化或曲线漂移，均在控。测定用试剂批号均相同，质控血清也相同，为分装后在—25℃冰箱冻存。不更换或更换试剂及质控血清，单单测定Glu结果在控，但是Glu检测结果在生化全套(28项)分析时极高(失控)，测定的低、高值的质控血清，低值的Glu结果约为靶值的2.5倍，高值的Glu结果约为靶值的1.5倍。查看其失控的反应曲线正常(图3)，但吸光度增加显著。以上分析表明：非Glu测定试剂及质控血清以及仪器的因素所致，可能是试剂间的交叉污染。寻找结果表明，是由二氧化碳检测试剂所致，将二氧化碳检测试剂换成蒸馏水后重新测定无论是生化全套还是单个测定Glu均在控。

       2．3 Tg低值质控血清失控，高值质控血清假性在控  查看其失控的反应曲线正常，但吸光度明显增加(图4)。我们再次测定低、高值质控血清，结果同前，更换新试剂后，再次测定低、高值质控血清均在控，表明非偶然误差所致，可能是人为误差所致，可能误将总胆固醇(TCH)测定试剂添加至Tg测定试剂中；我们试将TCH测定试剂替换Tg试剂，测定质控血清证实了我们的判断。

3 讨论

       先进的仪器设备虽然极大地提高了生化检验的效率，但是在检验结果失控的原因查找方面也带来了许多困惑。以往检测项目如果失控，先考虑质控血清或试剂的因素，多采用更换质控血清、试剂后重新检测，如果检测结果仍失控，有些则通过重新用校准血清标定的方法解决，但实际上用校准血清标定的方法往往难以解决失控。本文介绍的Glu测定结果失控，通过校准血清标定是无法解决的，无论如何校准，只要二氧化碳检测项目的试剂与Glu检测试剂是由同一根试剂针加入(先加二氧化碳试剂再加Glu试剂)，Glu结果就会失控，而且校准后Glu测定的F值变化不会太大。同样本文中的ALB失控，如通过校准血清标定后，其F值可增加1倍以上，同一厂家的试剂，在样品量未变的情况下F值变化太大是根本不可能的。另外本文中Tg的失控，如果不首先更换试剂，用校准的方法也无法解决失控。
       由于生化检验所采用的试剂，在生产技术、运输和储存方面均有极大地改善，尤其是现在多采用液体即用型试剂，无需配制，且有效期长，因此生化检验中由试剂变质所导致的失控已大大减少，但也不排除由于人为的误加试剂，所导致的失控。另一方面，在质控血清的使用、配制和贮存方面，由于都遵循准确加入溶剂量、室温静置(15～30)分钟、倒置数分钟后上下轻轻颠倒数次、然后分装置—20℃左右的冰箱冻存等原则，由质控血清过期、变质等所致的失控也相对少见。
       本文三种失控现象，ALB失控是由于加入血清样品后因搅拌系统故障所致的血清与试剂未充分混匀，而此时其它项目检测结果虽然有些许波动，但仍在控，此原因在于ALB测定是单试剂的终点法，其与试剂反应在1分钟内达终点(本仪器测定ALB的检测点：起始点：0点，终止点：2点，约72秒钟)，如果血清与试剂未充分混匀，则反应不彻底，造成结果偏低，这一点从ALB反应曲线(图2)可以看出来，至于曲线上的第二个平台，是第6-7点间搅拌系统Ⅲ的搅拌起作用。其它单试剂的检验项目如胆固醇、甘油三脂、钙、磷、镁等也是终点法，但检测点在0～16点，由于在第6～7点间搅拌系统Ⅲ的搅拌，可使反应达终点，故结果影响不大；而双试剂检测项目如葡萄糖、尿酸及酶类等也是因搅拌系统Ⅲ的搅拌，可使反应充分，故结果在控。在Glu失控的原因分析中，我们走了许多弯路，发现失控后，先更换了检测试剂后，仅测定质控血清的Glu值，测定结果在控，认为失控是由试剂误加或偶然误差所致，并继续测定了当天病人标本，但在与另一台仪器测定的Glu结果比较时，发现有异常偏高的标本，于是用校准血清重新标定(校正前后的F值变化较少)，再单测质控血清的Glu值结果在控，但测定质控血清(生化全套28项)，结果Glu值仍失控，且两次失控的Glu测定结果均相差极少且反应曲线除了吸光度增加外也未见异常。由于仅生化全套中的Glu失控，且在将二氧化碳试剂换成蒸馏水后，再做生化全套结果Glu值在控，故考虑为试剂问的交叉污染所致。本仪器中二氧化碳的测定试剂与Glu试剂是由同一根试剂针加入，可能是试剂针在吸前一检测项目(二氧化碳)试剂后洗涤不充分或残留部分试剂影响了Glu的测定。其影响的原因尚待进一步研究，可能是二氧化碳测定试剂中含有的NADH类似物恰好是Glu HK测定法的检测产物等原因。本文中Tg的低值质控血澍失控，高值质控血清假性在控的原因是将Tg试剂误加TCH试剂，由 TCH和Tg检测的波长相似，误加试剂后，实际上是用Tg的校准曲线测定了质控血清中TCH的含量，从而出现这种“失控”和“假性在控”共存的现象。
       总之，从本文三种失控现象的原因分析方法中可以得到以下结论：在全自动生化分析仪进行多项目同时测定的质控中，发现某一项目失控后。应首先观察该项目测定的反应曲线(没有条件的，可以打印出该项目测定各个读数点的吸光度值，在excel 电子表格中制出反应曲线)，再按以下步骤查找失控原因：①反应曲线正常的，应先单个测定该项目，如测定结果在控，则应首先考虑试剂间的交叉污染[3-5]或偶然误差[2]，可通过测定全部质控项目区分交叉污染和偶然误差；如测定结果仍失控，则应更换检测试剂，再测定该项目，如在控则考虑为试剂的变质、误加，如仍失控，再按文献的步骤进一步查找原因[2]：更换质控物、进行仪器的保养和维护以及用校准血清校准等。②反应曲线异常：应首先考虑试剂的变质、误加等，可先更换检测试剂(如ALB的双平台现象，可以肯定失控原因是由搅拌系统故障引起，可不必更换试剂)，再测定失控项目；反应曲线异常也可见于仪器的加试剂与样品系统、搅拌系统、反应杯、自动的反应杯冲洗系统、仪器光学系统的电压波动、灯泡老化等原因，但是此时失控的项目可能较多。